Cтраница 2
Давно известно ( Харди, 1899 г.), что белки мигрируют к аноду в щелочном растворе и к катоду в кислом растворе. Скорость, с которой происходит миграция белка, зависит от соотношения положительных и отрицательных зарядов в макромолекуле, а также и от формы последней; следовательно, скорость миграции при определенном рН является характерной константой каждого белка. [16]
Компонентом / может быть однозарядный ион слабого электролита, а компонентом 2 - любой одно -, двух - или многозарядный ион слабого электролита. Общий для всех фаз компонент 6 может быть ионом как сильного, так и слабого электролита. Образец растворяют в нижнем буферном растворе вместе со спейсерами, если таковые используются. Чтобы не тормозить миграции белков, в качестве носителя обычно выбирают полиакриламидный гель с низкой концентрацией. При установлении равновесия после приложения электрического поля все компоненты образца располагаются в виде стопки зон между фазами бета и дзета. Эта стопка слоев мигрирует как движущийся градиент рН постоянной ширины. Фазы альфа и дзета идентичны по составу, но их можно распознать, поскольку фаза дзета образуется внутри гелевой матрицы, где подвижности компонентов 1 и 6 могут несколько отличаться от их подвижно-стей в свободном растворе. [17]
Число фракций, на которые разделяется исходный белок при зональном электрофорезе, можно увеличить не только с помощью специальных методов окрашивания. Простая замена буферного раствора или поддерживающей среды дает тот же эффект. Еще лучшее разделение можно получить в поддерживающей среде, которая обладает эффектом молекулярного сита, например в крахмальном или полиакриламидном гелях. Малые размеры пор этих гелей задерживают миграцию высокомолекулярных белков, так как трение при этом увеличивается настолько, что даже большой электростатический заряд их молекул не может компенсировать замедляющего действия поддерживающей среды. Однако в других поддерживающих средах величина белковой молекулы мало влияет на скорость миграции, поскольку эффект увеличения трения обычно компенсируется ее большим электростатическим зарядом. [18]