Микроинъекция

Cтраница 1

Няня кормит из бутылочки ребенка, больного тяжелой формой комбинированного иммунодефицита ( SCID. Чтобы не заразить ребенка, няня одета в комбинезон, закрывающий все тело, а ее лицо и волосы закрыты маской. Генная терапия этого заболевания проводится путем введения гена, кодирующего фермент, в клетки костного мозга и последующей пересадки таких клеток ребенку, в организме которого они смогут образовывать нормальные лимфоциты. [1]

Микроинъекции и электропорация были описаны в разд. Эти методы можно использовать, однако они, по-видимому, менее эффективны, чем доставка нужных генов в клетки с помощью вирусов и липо-сом. [2]

Генетическая конструкция кДНК CFTG - ген р-казеина козы. Полноразмерная кДНК CFTR встроена между экзонами 2 ( ЕХ2 и 7 ( ЕХ7 гена Р - казеина козы. Сохранены промотор, терминатор и экзо-ны 1, 8 и 9 ( ЕХ1, ЕХ8 и ЕХ9 гена казеина. [3]

Микроинъекция ДНК в мужской пронуклеус. [4]

Трансгенных мышей получали микроинъекцией в пронуклеус оплодотворенной яйцеклетки или трансфекцией ES-клеток с помощью YAC, несущих несколько родственных генов или один большой ген. [5]

Отбирают яйцеклетки, переживших микроинъекцию ДНК, и вводят их в специальную микропипетку, с помощью которой привносят в яйцевод псевдобеременной мыши оплодотворенную яйцеклетку с включенной в нее клонированной ДНК. Часть пересаженных яиц погибает, а часть продолжает нормально развиваться. [6]

Впервые возможность переноса ДНК при помощи микроинъекций в пронуклеус оплодотворенной яйцеклетки мыши была проиллюстрирована Дж. Из 78 потомков, рожденных приемными матерями, два содержали плазмидную ДНК. [7]

Получение линии трансгенных мышей с использованием ретровирусных векторов. Эмбрион, обычно находящийся на стадии 8 клеток, инфицируют ре-комбинантным ретровирусом, несущим трансген. Самки, которым был имплантирован эмбрион ( суррогатные матери, производят на свет трансгенное потомство. Для идентификации мышат, несущих трансген в клетках зародышевой линии, проводят ряд скрещиваний.| Получение линий трансгенных мышей методом микроинъекций. Яйцеклетки выделяют из самок-доноров, у которых была индуцирована гиперовуляция и проведено спаривание с самцами. Трансгенную конструкцию инъецируют в мужской пронуклеус оплодотворенной яйцеклетки. Яйцеклетки имплантируют в суррогатную мать, которая производит на свет трансгенных мышат - основателей трансгенных линий. [8]

В настоящее время для создания трансгенных мышей чаще всего используют метод микроинъекций ДНК. [9]

Изолированные оперативным вмешательством яйцеклетки из яйцеводов выдерживают в атмосфере 5 % СО2 при 37 С до микроинъекции в них клонированных ДНК любого размера в количестве 1 - 2 нл 0 0001 - 0 0005 % раствора ДНК с помощью микроманипулятора. [10]

Электрическая микроплитка ( натуральная величина.| Держатель для проволочного электрического микронагревателя ( 1 / 2 натуральной величины. [11]

Эта задача возникает при изготовлении различных специальных стеклянных деталей, например, при вытягивании капилляров микроскопического размера или стеклянных игл, применяемых для микроинъекций и для препарирования клеток, а также в тех случаях, когда необходимо сделать углубления или зазубринки в очень тонких стеклянных мембранах. [12]

Успешные эксперименты на мышах показали, что генная терапия возможна. С помощью микроинъекции гены вводили в оплодотворенные яйцеклетки, несущие известное генетическое повреждение, и исправленные яйцеклетки реимплантировали обратно в материнский организм. При таком методе все клетки будущей мыши оказываются нормальными, потому что все они произошли от исправленной яйцеклетки. Эту процедуру называют терапией половых клеток. [13]

Обычно в опыт по микроинъекции берут не менее 20 гибридных самцов-производителей первого поколения ( FI) в возрасте 8 - 12 месяцев, когда они характеризуются хорошей производительностью. При слабой или низкой активности самцов к подсаживаемым самкам их заменяют. Донорами оплодотворенных яйцеклеток выступают не менее 10 неполовозрелых ( 12 - 14 г) гибридных самок первого поколения ( FI), подвергшихся суперовуляции и спариванию с гибридными самцами FI. Оплодотворенные одноклеточные яйца выделяют из операционно вскрытых яйцеводов самок-доноров спустя 12 часов после их спаривания с самцами-производителями. Выделенные яйца помещают в культуру на срок от 3 до 36 часов. [14]

При определении с помощью индикаторов восстановительной способности леток применяются два метода. Краситель или вводится в клетку микроинъекцией, или же красителю дают диффундировать в клетку. Метод микроинъекции не может применяться, если клетки малы или чувствительны к повреждению. [15]

Страницы: 1 2