Микроинъекция
Cтраница 2
Для этого вызывают у кошек эпилептогенные разряды внутрикортикальными микроинъекциями пеницилина G. Имеющиеся данные [56] указывают на различный характер действия диазепама в условиях такого эксперимента. На острую эпилептическую активность существенное действие оказывают метаболиты диазепама и их концентрация в головном мозге и плазме крови. [16]
При определении с помощью индикаторов восстановительной способности леток применяются два метода. Краситель или вводится в клетку микроинъекцией, или же красителю дают диффундировать в клетку. Метод микроинъекции не может применяться, если клетки малы или чувствительны к повреждению. [17]
В настоящее время все более популярным становится процесс, который является более контролируемым по сравнению с описанным выше. Из раннего зародыша берут несколько клеток, называемых стволовыми, и размножают, помещая на питательную среду. ДНК вводят в эти клетки различными способами, в том числе с помощью микроинъекции. Таким образом предупреждается рождение нежелательного нетрансгенного потомства. По-видимому, со временем станет возможным встраивать гены в специфические участки хромосом, что необходимо для их нормальной экспрессии. [18]
 |
Белковый состав ( г / л молока коров и овец. [19] |
Введение чужеродной ДНК мышам можно осуществить разными методами: 1) с помощью ретровирусных векторов, инфицирующих клетки эмбриона на ранних стадиях развития перед имплантацией эмбриона в самку-реципиента; 2) микроинъекцией в увеличенное ядро спермия ( мужской пронуклеус) оплодотворенной яйцеклетки; 3) введением генетически модифицированных эмбриональных стволовых клеток в предим-плантированный эмбрион на ранних стадиях развития. [20]
Это связано с некоторыми особенностями воспроизводства и развития птиц. Так, при оплодотворении у птиц в яйцеклетку могут проникнуть сразу несколько сперматозоидов, а не один, как это обычно бывает у млекопитающих, и идентифицировать тот мужской пронуклеус, который соединится с женским, становится невозможно. Метод микроинъекции ДНК в цитоплазму тоже не подходит, поскольку в этом случае ДНК не интегрируется в геном оплодотворенной яйцеклетки. Наконец, даже если удастся осуществить микроинъекцию ДНК в ядро, дальнейшие операции будет трудно осуществить, поскольку у птиц яйцеклетка после оплодотворения достаточно быстро обволакивается прочной мембраной, покрывается слоем альбумина и внутренней и наружной известковыми оболочками. [21]
Клетки, выделенные из мышиных эмбрионов на стадии бластоцисты, могут пролиферировать в культуре, сохраняя способность к дифференци-ровке в любые типы клеток, в том числе и в клетки зародышевой линии, при введении в другой эмбрион на стадии бластоцисты. ES-клет-ки в культуре легко модифицировать методами генной инженерии без нарушения их шпорипо-тентности. Например, в определенный сайт несущественного гена в их геноме можно встроить функциональный трансген. Это позволяет избежать случайного встраивания, характерного для метода микроинъекций и ретровирусных векторных систем. [22]
Генетическая модификация животных при помощи технологии рекомбинантных ДНК ( трансгеноза) основана на введении клонированного гена ( ов) в геном клетки, которая могла бы дать начало клеткам зародышевой линии. Обычно для этого вводили клонированный ген в оплодотворенную яйцеклетку мыши с помощью микроинъекции, имплантировали ее в реципиентную самку и проверяли потомство на наличие введенного гена. [23]
Это связано с некоторыми особенностями воспроизводства и развития птиц. Так, при оплодотворении у птиц в яйцеклетку могут проникнуть сразу несколько сперматозоидов, а не один, как это обычно бывает у млекопитающих, и идентифицировать тот мужской пронуклеус, который соединится с женским, становится невозможно. Метод микроинъекции ДНК в цитоплазму тоже не подходит, поскольку в этом случае ДНК не интегрируется в геном оплодотворенной яйцеклетки. Наконец, даже если удастся осуществить микроинъекцию ДНК в ядро, дальнейшие операции будет трудно осуществить, поскольку у птиц яйцеклетка после оплодотворения достаточно быстро обволакивается прочной мембраной, покрывается слоем альбумина и внутренней и наружной известковыми оболочками. [24]
Таким образом, из 1000 имплантированных оплодотворенных яйцеклеток развивается от 30 до 50 трансгенных мышат. Кроме того, введенная ДНК может интегрировать в любое место в геноме, и зачастую множество ее копий включаются в один сайт. В организме некоторых особей трансген может не экспрессироваться из-за неподходящего окружения сайта интеграции, а в организме других число копий чужеродного гена может оказаться слишком большим, что может привести к гиперпродукции белка и нарушению нормальных физиологических процессов. И все же, несмотря на все это, метод микроинъекций используют для получения линий мышей, несущих функциональные трансгены, довольно часто. [25]
Страницы: 1 2