Микроэлектрофорез
Cтраница 4
Рассмотрим подробнее особенности электрофоретического движения частиц дисперсной фазы и другие электрические. Электрофорез чаще всего проходит в неподвижной жидкости; только при электрофорезе в тонких плоских зазорах или в капиллярах ( микроэлектрофорез) движение частиц происходит в жидкости, перемещающейся вследствие электроосмоса. Внешнее электрическое поле при этом ( см. рис. V1I - 9) огибает частицы и на большей части поверхности параллельно ей. В таком случае скорость движения частиц VQ с достаточной точностью описывается уравнением Гельмгольца Смолуховского. [46]
При макроскопическом электрофорезе методом подвижной границы разделяющую среду стабилизируют, повышая ее вязкость с помощью сахарозы, желатины или крахмала. Часто в конструкцию электрофоретических камер вводят охладительные змеевики и водяные рубашки. При микроэлектрофорезе методом массопереноса и препаративных разновидностях свободного электрофореза наряду с платиной - универсальным электродным материалом для изготовления анодов - используют цинк, свинец, серебро, молибден, титан, покрытый двуокисью марганца, для изготовления катодов - цинк, титан, железо, никель. Конструктивно разнообразные электрофо-ретические ячейки отличаются прецизионным исполнением в основном лишь в тех случаях, когда они входят в качестве составного узла в измерительный преобразователь более сложного типа, использующий двойной эффект: электрохимический и оптический. [47]
Некоторые участки этих хромосом могут очень сильно увеличиваться в размерах, образуя так называемые пуффы. Исследование методом микроэлектрофореза дает возможность определять нуклеотидный состав РНК и ДНК ( стр. [48]
Если по оптическим и молекулярно-кинетическим свойствам суспензии и золи с твердой дисперсной фазой резко различны, то по агрегативной устойчивости они имеют много общего. Как правило, частицы суспензий, равно как и частицы лиофобных коллоидов, имеют на поверхности двойной электрический слой или сольватную оболочку. Электрокинетический потенциал частиц суспензий можно определить с помощью макро - или микроэлектрофореза, причем он имеет величину того же порядка, что и - потенциал частиц типичных золей. В определенных условиях в суспензиях, так же как и в золях, образуются пространственные коагуляционные структуры, способные к синерезису. Явления тиксотропии и реопексии при соблюдении соответствующих условий проявляются у суспензий почти всегда в большей степени, чем у лиофобных коллоидных систем. [49]
Если по оптическим и молекулярно-кинетическим свойствам суспензии и золи с твердой дисперсной фазой резко различны, то по агрегативной устойчивости они имеют много общего. Как правило, частицы суспензий, равно как и частицы лиофобных коллоидов, имеют на поверхности двойной электрический слой или сольватную оболочку. Электрокинетический потенциал частиц суспензий можно определить с помощью макро - или микроэлектрофореза, причем он имеет величину того же порядка, что и - потенциал частиц типичных золей. В определенных условиях в суспензиях, так же как и в золях, образуются пространственные коагуляционные структуры, способные к синерезису. Явления тиксотропии и реопексии при соблюдении соответствующих условий проявляются у суспензий почти всегда в большей степени, чем у лиофобных коллоидных систем. [50]
 |
Зависимость удельной электропроводимости х суспензии глины от концентрации С дисперсной фазы. [51] |
Мозаичный характер поверхностного заряда бентонитовых глин, наличие положительно и отрицательно заряженных участков приводит к тому, что для анализа механизма взаимодействия частиц с ПАА и модифицирующими добавками необходимо оценить величину и знак суммарного заряда, измерить электрокинетический потенциал и электрофоретиче-скую подвижность исследуемых образцов. ДЛФО является критерием устойчивости дисперсных систем. Нами с соавторами была определена величина - потенциала частиц глинистой части образцов методом микроэлектрофореза с помощью автоматического измерительного микроскопа PARMOQUANT фирмы Carl Zeiss JENA и с помощью установки макроэлектрофореза. [52]
Было установлено, что некоторые виды различаются по своим реакциям на антигены или антитела, и теперь проводятся серологические исследования различных групп членистоногих. Бойдеи [238] превосходно суммировал достижения в этой области. Другими таксономическими исследованиями в биохимической области, оказавшимися весьма полезными, являются микробиологические опыты, микроэлектрофорез и хроматография на бумаге. [53]
Дисперсии выдерживали, как правило, в течение месяца для установления равновесия в закрытых сосудах, периодически встряхивая. Для исследования обычно отбирали мелкодисперсную фракцию частиц из верхней части сосуда после непродолжительного отстаивания суспензии и помещали эту сравнительно разбавленную систему в измерительную камеру прибора для микроэлектрофореза. Диаметр частиц дисперсной фазы составлял приблизительно 0 1 мкм. [54]
Это явление, по-видимому, связано с образованием глинистой диафрагмы, содержащей капилляры с очень малыми радиусами, соизмеримыми с толщиной двойного слоя, вследствие неполного развития диффузных слоев. С увеличением концентрации эфира целлюлозы диафрагма становится более рыхлой, что приводит к увеличению электрокинетического потенциала. Подтверждается это и тем, что в присутствии 0 05 г / дл хлорида натрия, способствующего флокуля-ции суспензии, получены более высокие значения 1-потенциала, приближающиеся к величинам, найденным методом микроэлектрофореза. [55]
В 1967 г. Фельген-хауер [3] описал подобный метод для разделения 10 - 30 мкг белка с разрешающей способностью 1 - 3 мкг для одного белка. Гофман [4] для микроэлектрофореза белков вместо стеклянных капилляров применил плексигласовую камеру. [56]
 |
Схема прибора для измерения скорости микроэлектрофореза. [57] |
В этом случае поляризация электродов и электролиз значительно ослаблены, что позволяет работать с приборами, имеющими простое устройство. При этом перемещения частиц проявляются в виде колебаний около положения равновесия и проектируются как черточки, длина которых пропорциональна скорости перемещения на данном уровне. К сожалению, этот вариант микроэлектрофореза используется редко. [58]
Заполняют капиллярные трубки погружением в жидкую реакционную смесь, приготовленную для получения ПААГ. Под действием капиллярных сил жидкость заполняет трубки. При достижении специальной отметки капилляр сверху плотно закрывают и переносят в емкость с раствором смеси белков, подвергаемых эдектрофоретическому анализу. Заполненные таким образом капиллярные трубки помещают в аппарат для микроэлектрофореза. При создании электрического поля в аппарате происходит разделение белков в соответствии с величиной заряда, размером и формой макромолекул. [59]
Микрометод является прекрасным методом для опре - деления изоэлектрической точки белка. Изоэлектриче-ская точка имеет большое значение в химии белков. В этой точке свободный заряд на частице равен нулю, и при таком рН белок имеет минимальную растворимость. Частицы стекла микроскопически видимых размеров; помещаются в концентрированный раствор белка ( 1 - 2 %) и полностью покрываются белком в течение нескольких минут. Суспензия частиц стекла затем разбавляется соответствующим буфером; разбавленная суспензия помещается в кювету для микроэлектрофореза и определяется подвижность. Через эти точки проводится наилучшая линия и затем она интерполируется на нулевую подвижность. Значение рН, при котор м подвижность равна нулю, есть изоэлектрическая точка белка. [60]
Страницы: 1 2 3 4