Равновесный диализ

Cтраница 1

Равновесный диализ является обычным методом измерения связывания малых молекул ( лигандрв) с макромолекулами. По уменьшению концентрации лиганда ( например, НАД) и по известной концентрации макромолекул ( например, фермента) можно рассчитать число связывающих участков и константу диссоциации комплекса фермент - кофермент. Объемы внутреннего и внешнего отделений аппарата для диализа должны быть очень точно известны и проверены на удобной контрольной системе. [1]

Недостаток метода равновесного диализа состоит в том, что диффузионное равновесие через мембрану устанавливается в течение нескольких часов, хотя в большинстве случаев действительное химическое равновесие для реакции связывания достигается за доли секунды. Этот недостаток преодолевается использованием быстрого способа определения скорости отщепления радиоактивного лиганда при диализе от равновесной системы [103] фермент - лиганд. В таком случае даже при работе с неустойчивыми веществами быстро получают точные результаты. [2]

Здесь могут быть использованы методы, известные из энзи-мологии и белковой химии: равновесный диализ, ультрацентрифугирование, гель-хроматография и ультрафильтрация. Основной проблемой является здесь выяснение различий между специфическим и неспецифическим связыванием, в особенности при изучении связывания, проводимом на препаратах мембран и на частично очищенных белковых фракциях. В центральной нервной системе концентрации рецептора могут составлять несколько пикомолей на 1 г ткани, а нейромедиаторы благодаря своим полярным свойствам легко взаимодействуют, хотя и слабо, с полярными мембранными компонентами, расположенными вне рецепторной области. Ко), оно все же оказывается важным фактором, который следует принимать во внимание из-за большого числа присутствующих неспецифических связывающих центров. Таким образом, обнаружение рецептора в центральной нервной системе посредством изучения связывания возможно, если имеется лиганд с очень высоким сродством и с очень высокой удельной радиоактивностью ( 185 - 1010 расп. [3]

В наших работах для определения растворимости жидких углеводородов в растворах белков применяли методы равновесного диализа, спектрофотометрический, рефрактометрический, весовой. [4]

Степень связывания ионов белками можно определять различными методами; из них наиболее широко распространен метод равновесного диализа. При диализе ( так же как и при осмометрии) используют мешочек, стенки которого непроницаемы для молекул белка, но проницаемы для небольших ионов. Диализный мешочек с раствором белка помещают в раствор, содержащий необходимый ион. После установления равновесной концентрации диффундирующего иона по обе стороны мембраны измеряют концентрацию иона в растворе, не содержащем белка; разность начальной и конечной концентраций иона в не содержащем белка растворе позволяет определить концентрацию иона в растворе белка. Если концентрации иона по обе стороны мембраны равны друг другу, то это означает, что связывания не произошло. Если связывание имело место, то концентрация иона в белковом растворе должна быть выше, чем в растворе, не содержащем белка; разность концентраций может служить мерой числа ионов, связанных с одной молекулой белка. Для того чтобы исключить влияние эффекта Гиббса - Донна-на, равновесный диализ проводят обычно либо в изоэлектрической точке белка, либо при высокой ионной силе. Такие методы, как ультрафильтрация, распределительный анализ, а в некоторых случаях и адсорбционная спектрофотометрия, также могут служить для определения степени связывания ионов с белками. [5]

Существуют некоторые разногласия по поводу значения чисел, полученных при измерении связывания металла с сидерофилинами методом равновесного диализа. [6]

Взаимодействие белков с неполярными веществами ( например, с красителями, углеводородами, ПАВ, липидами, жирными кислотами) определяют методом равновесного диализа, рефрактометрическими, спектрофотометрическимп, электрофоре-тическими и другими исследованиями. Почти все методы можно отнести к одной из двух категорий, основанных на изменениях либо свойств реагирующих с белками молекул, либо поведения молекул белка. [7]

Стейнберг и Шахман детально изучили этим методом связывание метилового оранжевого с сывороточным альбумином. Полученные ими результаты очень близки к данным, полученным методом равновесного диализа. [8]

Кривые элюирования очень близки к изотермам связывания элюируемого вещества с иммобилизованным аффи-нантом, и, следовательно, из хроматограммы можно получить термодинамические параметры молекулярных взаимодействий. Метод эквивалентен повторяющемуся диализу и имеет много преимуществ по сравнению с обычным равновесным диализом. Например, он требует намного более низких концентраций и небольших количеств образца, несколько образцов разных молекул можно наносить одновременно и обнаруживать небольшие различия в связывающих способностях при хорошем разделении. [9]

Для системы метилцеллюлоза / ДСН имеются лишь две области солюбилизации, и свойства смешанных систем такого типа аналогичны свойствам систем катионный полимер / ДСН вне области осаждения. Свойства смесей метилцеллюлоза / ДСН детально были исследованы в работе [22] методами вискозиметрии и равновесного диализа. Сделан вывод о том, что уменьшение вязкости при этой концентрации является результатом дезагрегации ассоциатов молекул метилцеллюлозы. Авторы считают, что метилцеллюлоза сильнее связывает анионы додецилсульфата вследствие небольшого остаточного положительного заряда на кислороде эфирной связи. Это приводит к образованию кластеров, возникновению солюбилизационной способности и, несомненно, вызывает конфигурационные изменения полимера, аналогичные тем, какие наблюдаются в катионных полимерах. Более гидрофобный характер полимера, на который указывают измерения поверхностного натяжения, вероятно, способствует образованию комплексов с ПАВ. [10]

Его оценивали методами: 1) удерживаемых объемов, наблюдаемых при хроматографировании методом гель-проникающей хроматографии растворов неэлектролита вместе с амфифильным соединением ( водный N проникает в гель, мицеллярный N - нет); 2) равновесного диализа систем мицелла - солюбилизат; 3) кинетики реакции в условиях, когда реакционная способность мицеллярного N значительно отличается от реакционной способности водного N; 4) изменения рН буферных растворов, обусловленного сорбцией слабой кислоты неионными мицеллами. [11]

В работе [14], например, для этой цели применен равновесный диализ, Хейд и Тенфорд [15] воспользовались изопиестическим методом, а Эдельштейн и Шахман ставили ряд равновесных седиментационных экспериментов, меняя плотность растворителя изменением концентрации гуанидинхлорида и экстраполируя величину кажущегося парциального удельного объема к нулевой концентрации. [12]

Электродиализатор Паули. [13]

Мембрана непроницаема для коллоидных частиц, а низкомолекулярные вещества ( электролиты, органические вещества) постепенно диффундируют в воду; в результате происходит очистка коллоидного раствора. Степень очистки ограничивается устойчивостью коллоидных частиц или процессами их гидролиза при удалении электролитов. В некоторых случаях внешнюю воду не сменяют и процесс ведут до установления равновесия ( равновесный диализ) для изучения состава жидкости, находящейся между коллоидными частицами, или изменений в составе этой жидкости при различных процессах. Обычно для ускорения диализа коллоидный раствор перемешивают и диализаторы устраивают с большим отношением поверхности мембраны к объему жидкости. [14]

По-видимому, между активной областью, с одной стороны, и гаптеном или детерминантной группой АГ - с другой, имеется структурное соответствие. Гаптен конкурирует с детерминантной группой за место в активной области антитела. Сродство AT к гаптену, структурно сходному с детерминантной группой, определяется либо методом равновесного диализа, либо по торможению реакции преципитации антигена антителом при различных концентрациях гаптена. [15]

Страницы: 1 2