Cтраница 2
Для избирательности адсорбции несомненное значение имеют электрические заряды адсорбента и адсорбтива, так как разноименно заряженные частицы будут легче соединяться. Именно этим объясняется хорошее окрашивание щелочных белков клеточных ядер, заряженных в нейтральной среде положительно, кислыми ( отрицательно заряженными) красителями, а кислых белков протоплазмы - основными ( положительно заряженными) красителями. [16]
Иная картина обнаруживается при сорбции щелочных белков. Ионы фосфата способствуют их сорбции, a NaCl и КС1 в достаточной концентрации вытесняют щелочные белки с оксиапатита. Можно думать, что в двух столь различных ситуациях доминируют разные механизмы взаимодействия биополимеров с сорбентом. Рассмотрим несколько подробнее экспериментальные данные, относящиеся к этим механизмам. [17]
Далее следует сделать выбор между анионо - и катионообменни-ком. При фракционировании определенным образом заряженных молекул такой выбор ие представляет труда. Например, очевидно, что олигонуклеотиды следует делить на анионообменнике, а заведомо щелочные белки, например гистоны - на катионообменнике. [18]
Линейное расположение наследственных факторов в хромосоме позволяет предположить, что ДНК, составляющая основную часть этих факторов, располагается в хромосоме в строго определенном порядке. Мы установили, что она связана с белком, который образует каркас, или скелет, хромосомы. Это делается с помощью концентрированного, слегка подкисленного солевого раствора. Даже после удаления щелочных белков вид хромосом под микроскопом не изменяется, а при помещении их в нейтральную среду они сохраняют свою ДНК. Последнее свидетельствует о том, что ДНК в хромосомах с чем-то связана, так как в этой среде она обычно растворима; если бы ДНК не была связана, то она бы просто растворилась и вышла из хромосом. Вещество, с которым связана ДНК, представляет собой белок. Это доказывается действием на хромосомы чистого кристаллического трипсина, который переваривает белки. Полимеризованная ДНК при этом освобождается и образует плотный студень. Если же расщепить ДНК хромосом ферментом, который разрушает нуклеиновые кислоты, то остается белок в виде массы тонких извитых нитей, совершенно непохожих на хромосомы. [19]
Поскольку агароза для хроматографии представляет собой водный гель, о набухании ее говорить не приходится. Но следует помнить о том, что агарозу нельзя сушить ввиду необратимой деструкции геля. Агароза для хроматографии поставляется в виде суспендированных в воде сферических гранул диаметром 60 - 200 мкм, которые в таком виде и следует хранить. При кратковременном обсыхании колонки, заполненной агарозой, пока гранулы не начали терять находящуюся в них жидкость, хроматографпческне характеристики сорбента еще могут быть восстановлены. Связанные с агарозой остатки сульфокнслоты ( до 0.5 % по массе) могут сорбировать щелочные белки. Эта сорбция подавляется в присутствии 0 02 М NaCi или другой соли. Гранулированную агарозу для гель-фильтрации и синтеза аффинных сорбентов выпускают следующие фирмы: Pharmacia - под торговым названием Sepharo - se, Bio-Rad - под названием Bio-Gel A, LKB ( Швеция) и 1BF ( Франция) - под названием Ultrogel А. Подробные сведения об этих матрицах, а также о готовых аффинных сорбентах на их основе приведены в гл. [20]
Придумано много самых разнообразных и остроумных методов очистки белка. Но чтобы вы представили себе, как это делается, расскажем лишь об одном широко распространенном сейчас способе, предложенном в 30 - х годах шведским ученым Тизелиусом. Ведь все белки разные. В один входит больше аминокислот, обладающих щелочными свойствами, а в другой - кислыми. Значит, получится, что белки бывают щелочными и кислыми. Теперь поставим такой опыт. Возьмем раствор смеси этих белков и нальем в стакан. Опустим в него электроды и начнем пропускать электрический ток. Естественно, что кислые белки будут двигаться в одну сторону, причем более кислые быстрее, менее кислые медленнее, а щелочные белки поедут в противоположном направлении. [21]