Обработка - клетка
Cтраница 2
Существенное отличие между действием АДГ и альдостерона состоит в том, что для эффекта АДГ ( и соответственно цАМФ) не требуется вовлечения генома. Влияние альдостерона можно предотвратить путем угнетения синтеза белка в клетке, в то время как эффект АДГ сохраняется неизменным после обработки клеток актиномицином, препятствующим ДНК-зависимому синтезу РНК, а также после ингибирования разных этапов, ведущих к синтезу белка в клетке. [16]
Различная радиочувствительность клеток, находящихся в разных стадиях митотического цикла, также может быть связана с изменением степени конденсации хроматина. Так, увеличение в радиорезистентности клеток СНО при переходе из митотической фазы в S-фазу коррелирует с диспергированием хроматина [ Dewey W. Обработка клеток, которые находятся IB более радиорезистентной S-фазе, гипертоническим раствором, вызывающим конденсацию хроматина, приводит к увеличению радиочувствительности клеток. Следует, однако, отметить, что результаты такого рода экспериментов допускают неоднозначную трактовку [ Raaphorst G. P., Dewey W. [17]
Так продолжают в течение 7 мин. При этом важно, чтобы краситель испарялся, но бумага не подсыхала: После охлаждения ее снимают, препарат промывают водой и тщательно промокают фильтровальной бумагой. В результате такой обработки клетки со спорами равномерно прокрашиваются. Далее обесцвечивают цитоплазму клеток, но не споры, обрабатывая клетку 1 % - ным раствором соляной или серной кислот в течение 15 - 30 с. При превышении времени обесцвечивания может обесцветиться и спора. Затем препарат промывают водой и окрашивают метиленовым синим в течение 2 мин. Если все операции проделаны правильно, окраска получается контрастной и споры, окрашенные в ярко-красный цвет, четко выделяются на голубом фоне цитоплазмы. [18]
Протопласт состоит из цитоплазмы, покрытой мембраной. Разработан метод освобождения протопласта грамположительных бактерий посредством обработки клеток ферментом лизоцимом. Цитоплазма представляет собой водянистую или слегка вязкую массу - сложную композицию белков, жиров, углеводов и многочисленных других органических соединений, минеральных веществ и воды. Цитоплазма не гомогенная коллоидная жидкость, она содержит множество субмикроскопических мембранных структур, выявленных электронной микроскопией. В цитоплазматических белках найдено 20 различных аминокислот, обусловливающих различные свойства белков. Например, аминокислота тирозин имеет спиртовые группы ( ОН) в боковой цепи и этим обусловливает гидрофильность цитоплазмы. Липоиды, наоборот, обусловливают гидрофобность цитоплазмы. [19]
Обычно измеряют начальную скорость гидролиза ДНК хроматина нуклеазами, считая при этом, что продукты гидролиза представлены в основном спейсерными участками нуклеосом. При этом структура нуклеосом сохраняется. Повреждения, возникающие в ДНК нуклеосом при обработке клеток различными химическими агентами, характеризуются более избирательной локализацией, которая зависит от химической структуры соединения. [20]
При старении клубеньковые бактерии теряют подвижность и переходят в состояние так называемых опоясанных палочек. Такое название они получили вследствие чередования в клетках плотных и неплотных участков протоплазмы. Полосатость клеток хорошо выявляется при просмотре в световом микроскопе после обработки клеток анилиновыми красителями. Плотные участки протоплазмы ( пояски) прокрашиваются хуже, чем промежутки между ними. Пояски могут располагаться в середине клетки или на концах. Вероятно, с возрастом бактериальная клетка наполняется жировыми включениями, не воспринимающими окраску и вследствие этого обусловливающими исчерченность клетки. Термин бактероиды ввел в литера - ТУРУ Дж - Брунхорст в 1885 г., применив его к необычным по форме образованиям, значительно более крупным, чем палочковидные клетки бактерий, встречающимся в тканях клубеньков. [21]
 |
Фаг М1А ( темный участок МП соответствует генам, несущественным для его жизнеспособности. [22] |
Процесс введения плазм иды в клетку, вызывающий наследственные изменения в ней, называется трансформацией. Процесс инфекции клеток с помощью чужеродных ДНК, приводящий к образованию зрелого фагового потомства, называется трансфекцией. Практически наиболее общий способ трансформации и трансфекции основан на том, что при обработке клеток бактерий CaCh их мембрана становится проницаемой для ДНК. [23]
Это явление обусловлено дальнейшей постепенной диссоциацией комплекса частица целлюлозы флуореоцирующие антитела под воздействием специфического микроба, в результате чего освободившиеся флуоресцирующие антитела соединяются специфическими более прочными связями с гомологичными антигенами микробной клетки, тем самым усиливая ее специфическую флуоресценцию. При микроскопии препаратов заметно, что эти бактерии становятся более крупными из-за наслаивания на их поверхности молекул специфического флуоресцирующего белка. Ободок вокруг клетки становится очень выраженным, он достигает сверхяркой флуоресценции на 5 и б - f -, чего никогда не наблюдается при обработке клеток с помощью прямого и непрямого метода флуоресцирующих антител. [24]
Совершенно другой набор генов индуцируется в ответ на алкилирующие соединения. Как было сказано, часть повреждений, вызываемых в ДНК этими соединениями, репарируется за счет прямой реактивации метилтрансферазой, которая сама при этом инактивируется. Обработка клетки небольшими количествами алкилирую-щих соединений вызывает 30-кратное увеличение уровня метил-трансферазы и предотвращает гибель клеток под действием существенно больших доз алкилирующих мутагенов. [25]
Совершенно другой набор генов индуцируется в ответ на алкилирующие соединения. Как было сказано, часть повреждений, вызываемых в ДНК этими соединениями, репарируется за счет прямой реактивации метилтрансферазой, которая сама при этом инактивируется. Оказалось, что алкилированная метилтрансфе-раза служит активатором транскрипции и повышает активность ряда генов, в том числе собственного гена ada и гена а / / гА, кодирующего ДНК-Ьт-гликозилазу, специфичную к алкилированным основаниям. Обработка клетки небольшими количествами алкилирую-щих соединений вызывает 30-кратное увеличение уровня метил-трансферазы и предотвращает гибель клеток под действием существенно больших доз алкилирующих мутагенов. [26]
Процесс выделения из чистого сусла ничем не отличается от обычной химической процедуры. В то же время выделение из самого организма ( такого рода твердые объекты называют пленками, лепешками, мицелием или шариками) - может потребовать известной изобретательности, особенно если необходимо разрушить клетки. В таком случае удовлетворительные результаты может дать экстракция ацетоном или другим подходящим растворителем. К сожалению, обработка клеток большинства микроорганизмов органическими растворителями приводит также к экстракции стеринов и других липидов, что осложняет дальнейшие исследования. Поэтому химик должен стремиться сделать всегда все от него зависящее, чтобы обнаружить продукт реакции в чистом сусле. [27]
Изучать живую клетку трудно, так как в ней не видно почти ничего. А когда клетку обработают так, что выявляется ее строение, то возникают структуры, не существующие в действительности. Выход из этого заколдованного крута был один: следовало найти такие способы обработки клетки, при которых не возникали бы артефакты. [28]
Чтобы ответить на первый вопрос, были сделаны следующие опыты. У делящихся клеток точно измерялся газовый обмен, сопровождавшийся образованием в клетках перегородок. Можно, не изменяя величины газового обмена и сохраняя, следовательно, интенсивность сгорания в клетках, остановить процесс деления. Для этого нужно только прибавить к клеточным образованиям некоторые специфически действующие вещества. После обработки клеток фенилуретаном мы получаем их в том же состоянии обмена, как и до действия прибавленного лекарства, но только перегородки в этом случае не образуется. [29]
Страницы: 1 2