Образец - белок
Cтраница 1
Образец белка оставляют на воздухе в весовой комнате в течение 12 час. Затем отбираются две пробы, одна для определения влажности и другая для определения общего азота. [1]
К образцу белка добавляют 1 - 2 мл надмуравьиной кислоты и оставляют в закрытом сосуде в течение часа на холоде. После этого содержимое сосуда разводят водой в 50 раз и высушивают образец лиофилизацией или на роторном испарителе. Во избежание попадания сильного окислителя в приборы образцы белка можно высушивать в специально отведенном для этих целей вакуумном эксикаторе над NaOH. В этом случае раствор белка в надмуравьиной кислоте разбавляют равным объемом воды и выпаривают. Процедуру с добавлением воды и выпариванием над NaOH повторяют 3 раза. [2]
После нанесения образцов белка в трубочки наслаивают электродный буфер, затем заливают буфер в верхний резервуар. При использовании щелочных буферных растворов в них добавляют раствор бром-фенолового синего из расчета 0 5 - 1 мл красителя на 500 мл раствора, а в случае кислых буферов - метиленовый зеленый. Краситель маркирует движущийся пограничный слой во время электрофореза. [3]
Всего при хроматографировании одного образца белков отбирают обычно несколько сотен фракций по 5 мл каждая; хроматографирование проводят в течение нескольких десятков часов. [4]
Как схематически показано на рис. 3.10, образец белка помещают между верхней и нижней буферными системами. [5]
 |
Схема флуоресцентной кюветы. [6] |
Не надо специально объяснять, что ту же кювету можно применять для классической флуориметрии образцов белка в растворе. В этом случае раствор белка вводят в верхнюю часть проточной кюветы. Это позволяет, сохраняя в целом геометрию кюветы постоянной, сравнить спектры флуоресценции белков в растворе и на нерастворимой матрице. Описанная методика применена Барелом и Прайелсом [2] для исследования конформационных изменений различных а-лактаминов, связанных с агарозными носителями. [7]
 |
Схема опыта Грабара. [8] |
После окончания электрофореза в канавку О, прорезанную вдоль агарового блока на расстоянии порядка 1 см от нанесенного в начале образца белка А, заливается иммунная антисыворотка к исследуемой белковой смеси. Весь блок помещается на длительное время ( 7 - 14 суток) в сосуд, в котором поддерживается насыщенная упругость паров воды. Антитела диффундируют навстречу антигенам и дают при достижении критического интервала концентраций, благоприятного для преци-питиновой реакции, видимые глазом осадки в форме тонких дуг. Подобная форма осадков вполне понятна. [9]
Чибнэл, Рис и Вильяме [ 157А ] указывают на то, что некоторые белки в безводном состоянии настолько гигроскопичны, что требуют особых приемов при обращении. Поэтому определение азота и влажности следует проводить на раздельных образцах белков, высушенных на воздухе. [10]
 |
Очистка гемоглобина ( /.| Разделение смеси ДНК ( / и фенола ( 2 на сефадексе. [11] |
Как иллюстрация этой возможности на рис. 28 показана хроматограмма очистки природного белка - гемоглобина - от повареной соли, использующейся для выделения гемоглобина из сыворотки крови. Как видно из хромато-граммы, при пропускании смеси гемоглобина и NaCl через сефадекс G-25 можно получить образцы белка, не содержащие соли. [12]
После окончания полимеризации удаляют одну из герметизирующих прокладок ( см. инструкцию к прибору), вынимают из геля шаблон-гребенку и вставляют ячейку в прибор. После сборки прибора электродные камеры заполняют буферным раствором, а в лунки-колодцы на поверхности геля тонко оттянутым капилляром из стекла или из тефлоновой или полиэтиленовой трубочки наносят образцы белка. Необходимо, чтобы плотность образцов белка была выше плотности буферного раствора. Поэтому раствор белка готовят на 10 % - ном растворе сахарозы. После нанесения образца прибор подключают к источнику тока и проводят электрофорез. После того как маркерный краситель, вносимый с образцом белка, достигнет нижней границы пластины, источник питания выключают, сливают электродные буферы и вынимают гелевую ячейку. Из ячейки вынимают уплотнительные прокладки, аккуратно отделяют одно стекло от другого и переносят пластину геля в плоскую кювету или пластмассовую коробку. Для фиксации, прокраски и обесцвечивания используют те же растворы, как и в случае цилиндрических гелей. Время прокраски уменьшают в два раза. [13]
 |
Схема реакционной камеры. [14] |
Бэггом секве-натора - прибора, который с высокой эффективностью осуществляет последовательное автоматическое отщепление N-концевых аминокислотных остатков по методу Эдманв, В секвенаторе все реакции проводятся в цилиндрическом стеклянном стаканчике ( рис. 19), вращающемся с постоянной скоростью в атмосфере инертного газа. Исследуемый образец белка наносится в виде тонкой пленки на стенки стаканчика, а реактивы и растворители по шлангу подаются на его дно. За счет центробежной силы они поднимаются по стенкам, соприкасаются с пленкой белка, затем собираются в специальной канавке в верхней части стаканчика и удаляются по отводному шлангу. Большая поверхность соприкосновения между двумя фазвми способствует легкому проникновению реагентов сквозь пленку белка, быстрому протеканию реакций и беспрепятственной экстракции продуктов реакции. [15]
Страницы: 1 2