Cтраница 1
Олигомицин ингибирует оба процесса; атрактилозид не влияет на транспорт электронов и на синтез АТР в инвертированных пузырьках. [1]
Fj содержит белок, чувствительный к олигомицину - антибиотику, блокирующему синтез АТФ путем нарушения использования протонного градиента. В укороченной цепи переноса электронов отсутствует только первый этап, остальной перенос электронов такой же, как в полной цепи. [2]
Синтез АТР в митохондриях сильно ингибируется олигомицином. [3]
С каким из перечисленных ниже ингибиторов более всего сходен по своему действию DCCD: с антимицином А, ротеноном, олигомицином или арсена-том. [4]
Эта субъединица через белок Fe и олигомицинчувствительный белок ( ОЧБ) соединяется с субъединицей Flt синтезирующей АТР. Антибиотик олигомицин подавляет способность фермента синтезировать АТР. При обратном градиенте протонов или низкой концентрации ионов фосфата фермент осуществляет реакцию гидролиза АТР до ADP и иона фосфата. В настоящее время очень активно изучается молекулярный механизм синтеза и гидролиза АТР. Важную роль в этих процессах играет промежуточное фосфорилирование самого фермента. [5]
Помимо комплексов, катализирующих основные окислительно-восстановительные процессы в цепи переноса электронов, при достаточно мягком разрушении внутренней митохондриальной мембраны из нее выделяется комплекс белков, обладающий способностью в изолированном состоянии катализировать гидролиз АТФ до АДФ и ортофосфата. Гидролиз ингибируется макроциклическим антибиотиком олигомицином, в связи с чем этот фермент известен как олигомицин-чувствителъная АТФаза. При более жесткой обработке из нее удается выделить растворимую в воде, т.е. достаточно гидрофильную АТФазу, обозначаемую как Fi АТФаза, которая, в отличие от полного комплекса, олигомицином не ингибируется. Одновременно с F АТФазой выделяются мембранный фактор, являющийся гидрофобным компонентом полной АТФазы и обладающий сродством к олиго-мицину, и небольшой белок, который соединяет между собой Fi АТФазу и мембранный фактор. Более чувствительная к олигомицину АТФаза содержит десять разнотипных полипептидов - пять в составе Fi АТФазы. Имеющаяся широкая совокупность экспериментальных данных практически не оставляет сомнения в том, что главная биологическая функция олигомицин-чувствительной АТФазы заключается в осуществлении обратной реакции - фосфорилировании АДФ ортофосфатом с образованием АТФ. Это АТФаза часто фигурирует в литературе как АТФ сиптпа-за. [6]
В растительных митохондриях обнаруживается зависящее от энергии восстановление НАД сукцинатом, но здесь в отличие от митохондрий животных для этого используется только энергия АТФ. В митохондриях растений в присутствии олигомицина сукцинат восстанавливает лишь незначительную часть всего пиридиннуклеотида [8], что не согласуется с характером аналогичного процесса в митохондриях животных. В то же время в случае митохондрий корня свеклы и митохондрий маша добавление двухвалентных катионов сопровождается лишь небольшим ускорением дыхания ( Боннер мл. Робертсон, неопубликованные данные), а сдвиг окислительно-восстановительного состояния переносчиков при этом незначителен. [7]
Если реакция ( 3) не может происходить, то окисление прекратится, так: же как и фосфорилирование, потому что вещество А должно освободиться от X, перед тем как принять следующую пару атомов водорода ( или электро (), чтобы окисление могло продолжаться. Это, по-видимому, происходит при добавлении антибиотика олигомицина: и процесс фосфорилирования и перенос электронов прекращаются. Добавление разобщающего агента, например динитрофено-ла, катализирует энергетически выгодный гидролиз А - X. В этом случае окисление может продолжаться, поскольку соединение А свободно и может принимать электроны, но фосфорилирование прекратится. Действительно, было показано, что динитрофенол ослабляет ингибирова-ние дыхания, вызываемое олигомицином. [8]
Помимо комплексов, катализирующих основные окислительно-восстановительные процессы в цепи переноса электронов, при достаточно мягком разрушении внутренней митохондриальной мембраны из нее выделяется комплекс белков, обладающий способностью в изолированном состоянии катализировать гидролиз АТФ до АДФ и ортофосфата. Гидролиз ингибируется макроциклическим антибиотиком олигомицином, в связи с чем этот фермент известен как олигомицин-чувствителъная АТФаза. При более жесткой обработке из нее удается выделить растворимую в воде, т.е. достаточно гидрофильную АТФазу, обозначаемую как Fi АТФаза, которая, в отличие от полного комплекса, олигомицином не ингибируется. Одновременно с F АТФазой выделяются мембранный фактор, являющийся гидрофобным компонентом полной АТФазы и обладающий сродством к олиго-мицину, и небольшой белок, который соединяет между собой Fi АТФазу и мембранный фактор. Более чувствительная к олигомицину АТФаза содержит десять разнотипных полипептидов - пять в составе Fi АТФазы. Имеющаяся широкая совокупность экспериментальных данных практически не оставляет сомнения в том, что главная биологическая функция олигомицин-чувствительной АТФазы заключается в осуществлении обратной реакции - фосфорилировании АДФ ортофосфатом с образованием АТФ. Это АТФаза часто фигурирует в литературе как АТФ сиптпа-за. [9]
Антибиотики - вещества, образуемые различными микроорганизмами, стали применять для борьбы с болезнями растений немногим более 10 лет назад. Ряд из них обладает высокой активностью против фитопатогенных грибов и бактерий. Стрептомицин эффективен в борьбе против бактериального ожога семечковых, бактериозов фасоли, томатов, табака, шпината и декоративных культур, пятнистости листьев косточковых и пероноспороза табака. Актидион применяется при борьбе с ржавчиной сафлора, плодовой гнилью и пятнистостью косточковых, мучнистой росой бобовых, бурой ржавчиной пшеницы, черной пятнистостью роз и серой гнилью земляники; геликсин В - против гельминтоспориоза и пыльной головни пшеницы; гризиофульвин - против альтернариоза томатов, мокрой головни пшеницы; олигомицин - против ржавчины саф - - лора; фитоактин и фитостриптин - против мучнистой росы различных растений. Имеют значение трикотецин, фитобактериомицин и ряд других антибиотиков. Однако эти вещества в настоящее время не всегда доступны для широкой практики из-за высокой стоимости. [10]
Помимо комплексов, катализирующих основные окислительно-восстановительные процессы в цепи переноса электронов, при достаточно мягком разрушении внутренней митохондриальной мембраны из нее выделяется комплекс белков, обладающий способностью в изолированном состоянии катализировать гидролиз АТФ до АДФ и ортофосфата. Гидролиз ингибируется макроциклическим антибиотиком олигомицином, в связи с чем этот фермент известен как олигомицин-чувствителъная АТФаза. При более жесткой обработке из нее удается выделить растворимую в воде, т.е. достаточно гидрофильную АТФазу, обозначаемую как Fi АТФаза, которая, в отличие от полного комплекса, олигомицином не ингибируется. Одновременно с F АТФазой выделяются мембранный фактор, являющийся гидрофобным компонентом полной АТФазы и обладающий сродством к олиго-мицину, и небольшой белок, который соединяет между собой Fi АТФазу и мембранный фактор. Более чувствительная к олигомицину АТФаза содержит десять разнотипных полипептидов - пять в составе Fi АТФазы. Имеющаяся широкая совокупность экспериментальных данных практически не оставляет сомнения в том, что главная биологическая функция олигомицин-чувствительной АТФазы заключается в осуществлении обратной реакции - фосфорилировании АДФ ортофосфатом с образованием АТФ. Это АТФаза часто фигурирует в литературе как АТФ сиптпа-за. [11]
В цикле большой амплитуды объем митохондрии может меняться в несколько раз. Сокращение митохондрий вызывается добавлением АТФ. Процесс непосредственно связан с дыханием - с окислительным фосфорилированием. Наблюдается прямой параллелизм в инги-бировании сокращения и окислительного фосфорилирования олигомицином. [12]
В кювету перед измерением добавляют раствор Mg-АТФ до необходимой конечной концентрации. Линейность зависимости показания прибора от количества Н - ИОНОВ проверяют, добавляя в среду измерения небольшие порции раствора НС1 известной концентрации. Реакцию начинают добавлением СМЧ в количестве примерно 0 5 мг на пробу. При добавлении СМЧ измеряется АТФазная активность, а начальная скорость реакции не связана с неспецифическим ответом электрода на добавку. Чтобы проверить это, реакцию можно начать неактивным ферментом, например олигомицином - специфическим ингибитором АТФазы, действующим на Н - канал необратимо. После 5 - 10-минутной инкубации такие СМЧ добавляют в среду измерения активности и наблюдают неспецифическую реакцию электрода на эту добавку. Так как в ходе гидролиза уменьшается концентрация АТФ и накапливается ингибитор АДФ, скорость реакции падает. За истинную скорость принимают начальную скорость, которую определяют, проведя касательную к точке начала реакции или через несколько секунд после начала. [13]
Если реакция ( 3) не может происходить, то окисление прекратится, так: же как и фосфорилирование, потому что вещество А должно освободиться от X, перед тем как принять следующую пару атомов водорода ( или электро (), чтобы окисление могло продолжаться. Это, по-видимому, происходит при добавлении антибиотика олигомицина: и процесс фосфорилирования и перенос электронов прекращаются. Добавление разобщающего агента, например динитрофено-ла, катализирует энергетически выгодный гидролиз А - X. В этом случае окисление может продолжаться, поскольку соединение А свободно и может принимать электроны, но фосфорилирование прекратится. Действительно, было показано, что динитрофенол ослабляет ингибирова-ние дыхания, вызываемое олигомицином. [14]
Установлено также, что восстановление дыхательной цепи СМЧ сукцинатом или НАД-Н изменяет анизотропию спектра ЭПР спиновой метки. Оказалось, что добавление АТФ к суспензии неэнергизованных СМЧ вызывает значительные изменения спектра ЭПР - АТФ улучшает растворимость гидрофобной метки в мембранах СМЧ. По-видимому, такое изменение определяется конформационными изменениями структуры мембраны. Сходное влияние АТФ наблюдается и в интактных митохондриях. ДНФ и олигомицин в концентрациях более 1 мкг на 1 мг белка ингибируют этот процесс. При малых концентрациях ( 0 1 - 0 2 мкг на 1 мг белка) олигомицин подобно аллостериче-ским активаторам усиливает индуцированные АТФ конформа-ционные переходы в СМЧ. [15]