Олигорибонуклеотида

Cтраница 2

Разделив продукты исчерпывающего или частичного гидролиза РНК с помощью рибонуклеазы, структуру большинства РНК устанавливают путем сравнения нуклеотидных последовательностей перекрывающихся фрагментов. Каждый индивидуальный олигорибонуклеотид подвергают частичному гидролизу с помощью менее специфичной рибонуклеазы ( например, с помощью рибонуклеазы Т2), которая расщепляет все фосфоди-эфирные связи. Реакцию проводят в таких условиях, чтобы получить набор фрагментов, различающихся по длине на один нуклеотидный остаток. С помощью двумерной гомохроматографии на пластинках с DEAE-целлюлозой разделяют эти продукты и по характеристическому изменению подвижности укороченных на одно звено фрагментов судят о природе нуклеотид-ного остатка, который в исходном олигорибонуклеотиде занимал соответствующее положение. [16]

Хроматография олигорибонуклеотидов ( А п на обращенной фазе RPC5 ( с разрешения авторов. [17]

Во многих отношениях сорбент RPC5 проявляет свойства слабоосновного анионита: чем длиннее молекула олигонуклеотида, тем при более высокой концентрации противоиона он элюируется с колонки. Вместе с тем мы обнаружили, что гранулы полимера без покрытия обладают сродством к пуриновым, а не к пирими-диновым нуклеозидам. Поскольку ионообменный процесс протекает на поверхности гранул, равновесие между молекулами адсорбированного вещества и вытесняющими противоионами устанавливается быстро. В отличие от аниони-тов на основе целлюлозы, которые имеют фибриллярную структуру и поэтому способны удерживать длинные молекулы нуклеиновых кислот, на RPC5 можно фракционировать олигонук-леотиды, существенно различающиеся по молекулярной массе, например олигорибонуклеотиды [41], тРНК ( разд. [18]

Единственным исключением служат РНК-синте-тазы, которые значительно более эффективно используют в качестве матрицы РНК соответствующих фагов. Для терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы затравкой могут служить как полидезоксинуклеотиды, так и олигодезоксинуклеотиды, начиная с тринуклеозиддифосфата. Эффективными затравками реакции, катализируемой полинуклеотидфосфорилазой, являются низкомолекулярные олигорибонуклеотиды, в том числе динуклеозидмонофос-фаты. В реакции, катализируемой ДНК-полимеразой, в качестве матрицы могут выступать полидезоксинуклеотиды и некоторые по-лирибонуклеотиды. Однако полимеризация происходит и в присутствии коротких олигодезоксинуклеотидов. Очень медленная полимеризация наблюдается уже с тринуклеозиддифосфатами, заметно больше скорость реакции с гепта - декадезоксинуклеотидами. РНК-полимеразы из микроорганизмов могут использовать в качестве матрицы одно - и двухцепочечные полидезоксирибонуклеотиды и полирибонуклеотиды, а также олигодезоксирибонуклеотиды со степенью полимеризации 5 и выше и олигорибонуклеотиды приблизительно такого же размера. [19]

Страницы: 1 2