Определение - пролин
Cтраница 1
Определение пролина и оксипролина. [1]
Определение пролина и оксипролина. Иминокислоты - про-лин ( XVI) и оксипролин ( XVII) - отличаются от остальных аминокислот своей необычайно высокой растворимостью в этиловом спирте. [2]
Для определения пролина нингидрин малочувствителен, поэтому используют 0 5 % - ный раствор изатина в изопропило-вом спирте, содержащем 4 % уксусной кислоты по объему. После прогревания обработанной этим реактивом хромато-граммы в сушильном шкафу пролин проявляется в виде яркого синего пятна. Чувствительность реакции для пролина 0 1 мкг в 1 мкл. Пятна других аминокислот с изатином приобретают слабую розовую окраску. Оксипролин окрашивается в голубой цвет. [3]
Для определения пролина готовят нингидриновый реактив, содержащий 40 мл 6 М Н3Р04, 60 мл ледяной уксусной кислоты и 2 5 г нингидрина на каждые 100 мл смеси. Для растворения нингидрина эту смесь нагревают до 70 на водяной бане. [4]
 |
Определение аминокислот. [5] |
Это свойство используют для определения пролина в гидролизатах белков. Сухой остаток обрабатывают одновременно 4 мл 3 % - ного раствора трихлоруксусной кислоты и 1 мл 10 % - ного раствора фосфорномолибденовой кислоты ( для удаления пептонов) и фильтруют. Отбирают 0 5 мл фильтрата, вводят 0 5 мл 2 % - ного водного раствора нингидрина и нагревают 10 мин при 100 С. После охлаждения добавляют 50 мл воды и экстрагируют продукт реакции 10 мл изобутилового спирта в течение 3 мин. Верхний слой отделяют и измеряют оптическую плотность при 533 нм. [6]
 |
Список ряда работ, посвященных хроматографии аминокислот. [7] |
Однако описанный метод непригоден для определения пролина и других иминокислот. Определить пролин можно с помощью недавно предложенной [ 50а ] новой модификации этого метода. Амины и аминокислоты обрабатывают пиридоксалем, образующиеся при этом основания Шиффа при восстановлении превращаются в пиридоксиламинокислоты, флуоресценцию которых и измеряют с помощью приспособленного для этой цели анализатора аминокислот. Если для восстановления применяется бо-ротритид натрия NaBT4, то образующиеся кислоты можно определять радиометрическим методом. Пиридоксалевый метод пригоден также для определения пролина. [8]
Инг и Бергман [315] описали микрометод определения пролина по роданилатному осадку; в той же статье приведена и примененная аппаратура ( ср. [9]
Они образуют характерные, растворимые в спирте медные соли, а с тетрароданатодиаиилинохромовой кислотой, роданиловой кислотой [ CrjCNSJ - itCeHsNFbJjlH, дают труднорастворимые осадки, которые можно использовать для обнаружения и определения пролина. [10]
Они образуют характерные, растворимые в спирте медные соли, а с тетрароданатодианилинохромовой кислотой, роданиловой кислотой 1Сг ( СН5) 4 ( СбН5МН2Ь ] Н, дают труднорастворимые осадки, которые можно использовать для обнаружения п определения пролина. [11]
При этом достаточно провести однократное пропускание смеси растворителей бутиловый спирт - уксусная кислота - вода в соотноше - нии 4: 1: 5 в течение одних суток, так как аланин, от которого за это время пролив отделяется недостаточно полно, практически не дает окрашивания с нингидрином в сильнокислой среде, т.е. на ре - эультат определения пролина не влияет. [12]
Результаты определения пролина после его хроматограф ичес-кого и элек. [13]
Следует отметить, что применение электрофореза несколько ограничивает - ся тем, что на нижнюю часть пятна пролина накладьюается пятно л зина. Лизин же в сильнокислой среде дает с нингидрином окрашивание, хотя и слабое. Определение пролина в присутствии лизина оказывается менее точным. [14]
С в течение 5 мин. Пролин и пептиды, содержащие пролин в N-концевом положении, дают интенсивное голубое окрашивание. Фенилаланин и тирозин при этом окрашиваются в зеленовато-голубой цвет, что является помехой при определении пролина и оксипролина. [15]
Страницы: 1 2