Cтраница 2
В разбавленном растворе полимера в хорошем растворителе гибкие макромолекулы находятся в виде рыхлых клубков, внутри которых заключен растворитель. При оседании молекул полимера растворитель увлекается вместе с ними, и количество свободного растворителя, заполняющего межмолекулярные пространства, соответственно уменьшается. Вследствие этого скорость седиментации частиц со временем уменьшается. Поэтому определение скорости седиментации проводят в разбавленных растворах полимера в плохом растворителе. [16]
Метод ультрацентрифугирования Сведберга служит для определения молекулярного веса. При вращении с очень большой скоростью ячейки, содержащей раствор белка, молекулы белка под действием центробежных сил движутся от центра со скоростью, зависящей от величины молекулярного веса. Специальная оптическая система дает возможность наблюдать и фотографировать ячейку во время центрифугирования. Молекулярный вес может быть найден либо из определения седиментационного равновесия, либо по скорости седиментации. Хотя теоретически первый метод точнее, для достижения равновесия требуется длительное время, и поэтому более точные значения получают исходя из определения скорости седиментации. [17]
Если проводить опыт при 5 в присутствии высокой концентрации соли ( например, 2 6 М NaCl), то локальной денатурации удается избежать. Долю препарата, подвергшуюся разрушению, определяют методом хроматографии или зонального центрифугирования. За критическую скорость перемешивания принимают скорость, при которой разрушается 50 % образца; молекулярный вес неизвестного образца равен молекулярному весу стандартного образца, имеющего ту же критическую скорость. Таким способом было найдено, что молекулярный вес ДНК фага Т5 равен 84 000 000, что соответствует данным седиментационного анализа. Ясно, что критическая скорость перемешивания не зависит ни от нуклеотидного состава, ни от степени глюкозилирования ДНК; оказалось, что данным методом можно уловить 5 % - нов различие в массе образцов - чувствительность, сравнимая с чувствительностью метода определения скорости седиментации. [18]
Шведские химики Сведберг1 и Тизелиус2 внесли большой вклад в развитие химии белка разработкой аналитических методов, чрезвычайно удобных для характеристики этих, высокомолекулярных соединений. Метод ультрацентрифугирования Сведберга служит для определения молекулярного веса. При вращении с очень большой скоростью ячейки, содержащей раствор белка, молекулы белка под действием центробежных сил движутся от центра со скоростью, зависящей от величины молекулярного веса. Специальная оптическая система дает возможность наблюдать и фотографировать ячейку во время центрифугирования. Молекулярный вес может быть. Хотя теоретически первый метод точнее, для достижения равновесия требуется длительное время, и поэтому более точные значения получают, исходя из определения скорости седиментации. Тизелиус предложил ( 1937) электрофоретический метод разделения молекул белка: в электрическом иоле молекула белка движется со скоростью, определяющейся величиной молекулы, ее формой, количеством и типом ионизированных групп. Материал, кажущийся гомогенным по растворимости, может содержать компоненты, отличающиеся по электрофоретической подвижности. [19]