Остатки - урацил
Cтраница 2
На матрице агарозы ковалентно-закрепляют комплементарный синтетический гомополимер поли ( и) длиной около 100 остатков. Его прочно фиксируют на BrCN-акти-вированной сефарозе во мноих точках по длине полимера через тау-томерные енольные формы остатков урацила. Концентрация поли ( П) в продажном препарате Poly ( U) - Sepharose 4B фирмы Pharmacia составляет 0 5 мг на 1 мл набухшего геля. Для средних по размерам мРНК животного происхождения это обеспечивает емкость сорбента около 150 мгк мРНК на 1 мл геля. [16]
РНК-полимераза требует для своего функционирования присутствия ДНК. Фермент наиболее активен, если в качестве матрицы используется природная двухцепочечная ДНК из того же самого или из какого-либо другого организма. Из двух цепей ДНК транскрибируется только одна. В места, соответствующие остаткам аденина ДНК-матрицы, в новосинтезированную РНК включаются остатки урацила ( U), поскольку аденин и урацил образуют комплементарную пару. В места же, соответствующие тими-новым остаткам ДНК-матрицы, включаются остатки аденина. Остатки гуанина и цитозина в ДНК-матрице определяют включение соответственно цитози-новых и гуаниновых остатков в цепь РНК. Анализ нуклеотидного состава и нуклеотиднои последовательности новообразованной РНК показал, что она обладает противоположной по отношению к матрице полярностью и ее последовательность комплементарна последовательности матричной цепи. [18]
Что произойдет, если ввести синтетический рибонуклеотид в бесклеточную систему, синтезирующую белок. Очевидно, в си -, стеме шел синтез полифенилаланина. Отсюда можно было заключить, что кодом фенилаланина служит последовательность остатков урацила. Обладая свойствами информационной РНК, большая часть поли - У после введения в систему быстро распадается. Эти результаты подтверждают точку зрения, согласно которой поли - У играет роль синтетической информационной РНК. При введении в эту систему также поли - А образуются сложные двух - и трехцепочеч-ные спирали поли - ( У А) и поли - ( ГУ А), причем включение фенилаланина прекращается. [19]
Показано ( обзоры - см. 155 - 158), что при облучении рентгеновскими и улучами в присутствии кислорода производные тимина, урацила и цитозина образуют гидроперекиси за счет присоединения по двойной связи С-5-С-6. Эти гидроперекиси могут затем превращаться в гликоли и - в случае производных цитозина и урацила - в производные изобарбитуровой кислоты. Образующиеся продукты присоединения могут далее разрушаться. При действии на нуклеиновые кислоты перекиси водорода 122 12з, ив, 145 146 или ионизирующей радиации 144146 I55 - 158 наряду с модификацией оснований происходит интенсивная деструкция полинуклеотидной цепи. Пользуясь значительным различием скоростей модификации оснований при высоких значениях рН, можно добиться селективной модификации остатков урацила в составе РНК или тимина в составе ДНК. Отсутствие информации о природе продуктов расщепления, образующихся под действием перекиси водорода, не позволяет пока судить о возможностях применения этого реагента для целей модификации. [20]
Из экспериментов со смешанными спиралями сополимера АУ и полимеров поли - У и поли - А получены новые данные, касающиеся спаривания оснований. Одноцепочечный сополимер АУ представляет собой цепочку, составленную из аденина и ура-цила, соединенных в случайной последовательности. Были получены образцы сополимера АУ с различными отношениями А: У. Во всех случаях при образовании смешанной спирали с поли - А или поли - У минимум поглощения в ультрафиолетовой области спектра наблюдался при одинаковом числе комплементарных оснований в сополимере и гомополимере, но не при равном количестве молекул того и другого компонентов. Таким образом, имеет место соотношение 1: 1 между комплементарными основаниями двух полимеров, а не между их молярными содержаниями. В этом случае число остатков урацила в гомополимере в 2 раза больше числа остатков аденина в сополимере. Очевидно, остающиеся без пары основания ( например, урацил в сополимере АУ в последнем примере) должны образовывать петли, выходящие из структуры двух - или трехцепочечной опирали. Анализ модели показывает, что выходящая из спирали петля может быть образована даже всего лишь одним основан ием. Считают, что такие петли играют важную роль в структуре РНК. Благодаря им может также сохраняться двойная спиральная структура ДНК при выпадении или включении оснований в одной из цепей. [21]
Страницы: 1 2