Cтраница 4
Избирательное окисление биозида маннита XXXVII, полученного восстановлением трисахарида XXXIV, протекает в первую очередь по ациклическим а-гликольным группировкам. Восстановление полученного альдегида боргидридом натрия приводит к биозиду глицерина XXXVIII. Последний окисляют двумя молями тетраацетата свинца. При этом быстро и избирательно окисляется концевой остаток маннозы ( ср. [46]
Это правило заключается в том, что молекулярное вращение гликозида ( Ш ] в [ а ] вМ / 100) приблизительно равно алгебраической сумме молекулярных вращений сахарного остатка и агликона. В случае олигосахаридов за агликон принимаются мрносахаридное звено или звенья, связанные с нередуцирующим концевым остатком. Практически задача определения конфигурации гли-козидной связи сводится к вычислению молекулярного, а отсюда и удельного вращения для гликозидов с а - и fl - связями и сравнению с вычисленными величинами экспериментально найденного [ а ] в исследуемого соединения. За удельное вращение нередуцирующего концевого остатка принимают вращение гликозида соответствующего сахара с оптически неактивным агликоном, например, если в оли-госахариде концевой остаток - D-глюкозильный остаток, - исходными величинами будут удельные вращения метил-а - О-глюкозида и метил-р - О-глюкозида. Отсюда вычисляют молекулярное вращение а - и fl - глюкозильных остатков. [47]
W-ацильные группы, найденные в некоторых белках, расщепляются наряду с остальными амидны-ми связями. Белок вируса табачной мозаики, например, содержит a - jV - ацетилсерин с УУ-конца, e - jV - ацетиллизин встречается в гистоне тимуса теленка. Формилметионин обнаружен в некоторых белках бактерий; известно, что для начала биосинтеза белка в этих организмах аминокислота должна быть формилирована, после чего она прикрепляется к транспортной РНК. Ряд пептидных гормонов содержит пироглутаминовый остаток ( пир-ролидонкарбоновую кислоту) в качестве jV - концевого ( к этому приводит самопроизвольная циклизация jV - концевого остатка глу-тамина), который раскрывается в условиях гидролиза, давая глу-таминовую кислоту. Тирозин-0 - сульфат, обнаруженный впервые в пептидах, полученных при свертывании фибриногена быка, и образующийся из тирозина ферментативно, распадается при кислотном гидролизе, хотя устойчив при щелочном. Фосфопротеины содержат 0-фосфосерин и 0-фосфотреонин; они теряют фосфорную группировку в условиях нормального кислотного гидролиза, тогда как в более мягких условиях можно избирательно расщепить пептидные связи и обнаружить эти остатки в гидролизатах. [48]
В молекулах ДНК все функциональные группы углеводных остатков нуклеотидных звеньев, находящихся в середине полимерной цепи, замещены и свободными являются лишь гидроксильные группы концевых остатков дезоксинуклеотидов. Таким образом, единственной свободной функциональной группой углеводных остатков является гидроксильная группа З - концевого остатка ну-клеотида. В циклических ДНК даже эта единственная группа отсутствует. В противоположность этому в молекулах РНК каждое нуклеотидное звено, находящееся в середине полимерной цепи, содержит свободную гидроксильную группу при С-2 остатка рибозы, а З - концевой нуклеотид цепи имеет незамещенную 2 3 -цис-глп - кольную группировку. В аминоацил-т РНК по одной из гидроксиль-ных групп З - концевого остатка нуклеотида присоединяется слож-ноэфирной связью остаток аминокислоты. [49]
Во втором случае на аффинном сорбенте должны быть закреплены вполне определенные участки генома. В последнее время возникла еще одна область использования иммобилизованных НК - в качестве праймеров матричного синтеза. Эти приложения предъявляют разные требования к характеру фиксации НК на матрице. В первом случае расположение точек закрепления на молекуле НК может быть произвольным, во втором определенные и достаточно протяженные участки полинуклеотид-ной цепи должны быть свободны для комплементарного взаимодействия, а в третьем закрепление НК на матрице желательно осуществить лишь по одному определенному концу молекулы. Что же касается возможности реакций с активированными матрицами, то вдоль всей молекулы НК во множестве располагаются химически эквивалентные группы: аминогруппы нуклеиновых оснований, гид-роксилы Сахаров и др. В особом положении находится только концевой остаток фосфорной кислоты или сахара. [50]
В соответствии с этим для установления строения олигосахаридов используют количественное определение расхода периодата и образовавшейся муравьиной кислоты и формальдегида, а также изучение природы моноса-харидгых ЗЕеньев, оставшихся неизмснрыки при действии окислителя. Примером использования периодатного окисления может служить установление строения восстанавливающего трисахарида XVI, построенного из остатков D-ксилозы. На основании данных о скорости его гидролиза было установлено отсутствие фуранозидных связей. Трисахарид поглощал 4 моль периодата с образованием 3 моль муравьиной кислоты; при гидролизе продукта окисления была получена D-ксилоза. Неокисляемый остаток ксилозы может занимать одно из двух положений: а) среднее звено с 1 - 3-связью в неразветвленном трисахариде; б) восстанавливающее звено с 1 - 2 - и 1 - - 4-связями в разветвленном трисахариде. Однако последняя структура должна была бы привести к поглощению 4 моль периодата с образованием 2 моль мурагьиной кислоты, что не согласуется с экспериментальными данными. Таким образом, исследуемый три-сахарид имеет неразветвленную структуру, а концевой осттгок присоединен к среднему звену 1 - - 3-связью. Концевой остаток ксилопиранозы должен поглощать 2 моль периодата и давать 1 холь муравьиной кислоты, следовательно, на окисление восстанавливающего звена расходуется 2 моль периодата и выделяется 2 моль муравьиной кислоты. Образование второго моля муравьиной кислоты связано с отщеплением формильного остатка, происходящего из гликозид-ного атома углерода. Таким образом, строение трисахарида установлено полностью, кроме конфигурации гликозид-ных связей. [51]