Раствор пероксидазы

Cтраница 1

Раствор пероксидазы, необходимый для калибрирования шкалы, так же как и для определения эстеразы ( см. ниже), приготовляется следующим образом. [1]

При нагревании растворов пероксидазы с едким натром выделяется сначала аммиак, а затем основание, имеющее запах пиридина. Однако пероксидаза, повидимому, не является белковым соединением, так как ни исходный продукт, ни очищенные препараты не дают известных реакций на белок. [2]

При нагревании растворов пероксидазы до кипения специфические свойства фермента исчезают. Однако, как это уже было показано Вудсом9 на пероксидазе из табака, по истечении нескольких часов пероксидаза регенерирует. Вторичное нагревание окончательно разрушает пероксидазу. Вудс придерживается той точки зрения, что для оксидазы и пероксидазы существуют зимогены, которые значительно устойчивее по отношению к нагреванию и к другим агентам, чем активные ферменты. В спиртовом растворе пероксидаза разрушается при температуре кипения спирта. [3]

Интенсивность выделения иода ( в см3 N гипосульфита. [4]

В этих опытах к раствору пероксидазы прибавлялись различные количества раствора иода, содержание иода в которых было точно известно; через определенные промежутки времени обработанная таким образом пероксидаза применялась для активации перекиси водорода описанным ранее способом. Само собой разумеется, что из полученных чисел вычиталось количество иода, прибавленное заранее, а также результаты, полученные в контрольных опытах. [5]

Перекись водорода, раствор иода и раствор пероксидазы смешивались в определенных пропорциях; через определенные промежутки времени смесь исследовалась указанным выше способом. [6]

Уже из этой таблицы можно видеть, что регенерация ферментативных свойств в прокипяченном растворе пероксидазы зависит от двух условий: 1) от актуальной кислотности раствора и 2) от присутствия атмосферного-кислорода. Следующая серия опытов еще более ясно обнаруживает эту зависимость. [7]

Для калибрирования шкалы, так же как и для нижеописанных опытов, этот раствор пероксидазы разбавляется в 20 раз. [8]

Ввиду того что в описанных явлениях могла играть роль щелочность цианистого калия, опыты были повторены с теми же растворами пероксидазы и цианистого калия, но с той разницей, что перед смешиванием реактивов синильная кислота выделялась из цианистого калия стехиомет-рическим количеством уксусной кислоты. [9]

Тот же опыт был повторен в тех же условиях с гидрохиноном. Свежеприготовленный раствор чистого, несколько раз перекристаллизованного в кварцевой посуде из бидестиллята гидрохинона, смешанный с раствором пероксидазы, долгое время оставался бесцветным при взбалтывании с кислородом. Но если вместо свежего раствора взять раствор, постоявший несколько дней на воздухе и слабо окрасившийся в розоватый цвет, то уже по прошествии короткого времени наблюдается заметное потемнение смеси. Объясняется это тем, что, как показали Виланд и Франке, чистейший гидрохинон, не содержащий железа, при стоянии на воздухе дает перекись водорода. [10]

В отсутствии перекисей пероксидаза не оказывает ни малейшего окисляющего действия. Свежеприготовленная гваяковая настойка не окрашивается пер-сксидазой; однако гваяковая настойка, простоявшая лишь несколько часов, окрашивается более или менее интенсивно в синий цвет раствором пероксидазы. Как уже было доказано Шенбейном46, пероксидаза активирует перекись водорода не только по отношению к гваяковой настойке, по и к крахмальному раствору с йодистым калием. Она также активирует все перекиси, образующиеся при окислении органических соединений воздухом. Новые данные Линоссье47, Гунгера48, а также Баха и Шода49 только подтверждают наблюдения, сделанные уже Шенбейном. [11]

Шесть тонкостенных пробирок, содержащих по 1 см3 чистейшего раствора пероксидазы ( 0.001 7 г перекиси водорода), были поставлены в кипящую воду. Оказалось, что полное разрушение пероксидазы наступает только после 18-минутного нагревания в кипящей воде. Исходный раствор пероксидазы был затем разбавлен в 20 раз дестиллированной водой. [12]

Растворяют 5 - 10 мг пероксидазы в 1 мл дистиллированной воды при легком перемешивании до конечной концентрации 5 мг / мл. Концентрацию определяют по формуле Л40з 0 44Х, где X - фактор разведения, Л403 - оптическая плотность раствора при 403 нм. При этом раствор пероксидазы должен изменить цвет от золотисто-коричневого до зеленого. Инкубируют в темноте при легком перемешивании в течение 20 мин. [13]

После 30-минутного стояния при комнатной температуре отщепленный и окисленный гваякол определяют колориметрически тем же способом, что и в случае пероксидазы, - окислительная система прибавляется одновременно с раствором крови, чтобы окислять гваякол по мере его отщепления, так как в противном случае действие эстеразы прекращается, вероятно, вследствие тенденции к установлению равновесия. Если употреблять достаточно разбавленный раствор пероксидазы, то в контрольной пробе окрашивания не появляется. [14]

Таким образом, в то время как для полного прекращения действия пероксидазы необходимо 2 молекулы солянокислого гидроксиламина - по отношению к активированной перекиси водорода - пероксидаза разрушается уже Дмолекулы сульфата гидразина. Причина этой разницы мне неясна. Возможно, что здесь играет некоторую роль природа кислоты, связанной с основанием. Раствор пероксидазы, к которому прибавлен солянокислый гидроксиламин и сульфат гидразина, имеет сильно кислую реакцию, поскольку указанные соли сильно диссоциированы гидролитически уже в водном растворе. [15]

Страницы: 1 2