Cтраница 2
Метод внутреннего стандарта имеет следующие преимущества: не нужно точно измерять количество вводимого образца, ненужно определять величину отклика детектора или поддерживать ее строго постоянной, поскольку определяются не абсолютные величины, а их отношение. Пик внутреннего стандарта должен быть полностью отделен от пиков других соединений, но в то же время он должен располагаться достаточно близко от пика определяемого соединения, концентрация стандарта должна быть приблизительно такой же, как и концентрация определяемого компонента, и наконец, стандарт должен быть структурно похож на анализируемое соединение. [16]
Он выходит примерно в средней части хроматограммы сырой нефти и имеет число углеводородных атомов, при котором не происходит интерференции с другими соединениями. Приготавливалась смесь сырой нефти, содержащая 5 % ( масс.) С20Н42; ее проба объемом 0 4 мкл вводилась в колонку. Точность этого метода в значительной степени зависит от правильности определения площади пика внутреннего стандарта. Относительно небольшие погрешности при расчете площади этого пика могут привести к значительным ошибкам при определении результатов имитированной дистилляции. Точность метода ограничивается также тем, что количество продукта, используемого в качестве внутреннего стандарта, не должно превышать 5 % ( масс), так как в противном случае возможна перегрузка детектора. Все это приводит к невысокой сходимости результатов определений. [17]
Далее проверяют линейность работы детектора и определяют нормировочный множитель. В прибор вводят пробы стандартных растворов А, В и С в трех повторностях. Для каждого раствора определяют среднюю величину отношения площади пика пестицида к площади пика внутреннего стандарта и рассчитывают нормировочный множитель по формуле: К ( SsH. [18]
Вводят растворы, указанные в статье, и измеряют площади пиков. Это делается для того, чтобы убедиться в отсутствии постороннего пика ic тем же временем задержки, что и внутреннего стандарта, а также для того, чтобы обеспечить возможность количественного определения при наличии постороннего пика. Рассчитывают содержание испытуемого вещества на основании отношения разности между пиком испытуемого вещества или пиком стандартного вещества, с одной стороны, и пиком внутреннего стандарта - с другой. В случае применения методики наружного стандарта содержание рассчитывают путем сравнения пиков испытуемого вещества и стандарта в различных пробах. При определении компонентов сложной смеси может быть применена методика нормализации, основанная на расчете площадей отдельных пиков в процентах по отношению к общей площади всех пиков. Если в статье указаны методики градиентной хроматографии, то необходима специальная система насосов, позволяющая поставлять подвижную фазу с постоянно меняющимся составом. Изменение состава подвижной фазы от начального до конечного должно произойти за определенный промежуток времени, указанный в статье. Когда состав подвижной фазы изменяется линейно, методика называется линейной градиентной хроматографией. В этом случае проводят контрольное определение с введением растворителя, используемого для приготовления испытательного раствора. Это делают для того, чтобы удостовериться в том, что базовая линия на протяжении всего градиента находится в нужном интервале и что на хромато-грамме нет ложных пиков. [19]
Чтобы исключить влияние размера пробы, иногда пользуются методом внутреннего стандарта для количественной оценки состава смеси. Согласно этому методу, в пробу добавляют известное количество соответствующего чистого вещества ( внутреннего стандарта); обычно применяется вещество, не присутствующее в пробе. Пик внутреннего стандарта должен находиться недалеко от пика определяемого компонента, но не перекрывать его. Для большей точности высота пика внутреннего стандарта не должна сильно отличаться от высоты пика определяемого компонента. Для построения градуировочного графика готовят искусственные смеси с точно определенным количеством внутреннего стандарта и полученная смесь хроматографируется. [20]
После выхода на режим прибор должен регистрировать горизонтальную базовую линию. Для проверки стабильности работы прибора инжектируют 3 мкл стандартного раствора С. После прохождения всех пиков и выхода показаний прибора на базовую линию эту операцию повторяют еще дважды. Определяют отношение площади пика пестицида к площади пика внутреннего стандарта. Если она окажется выше, необходимо проверить герметичность газовых линий прибора и провести дополнительную стабилизацию колонки. [21]
Получают дифференциальную хромато-грамму, вводя выбранный объем раствора 1 через отверстие для ввода пробы в хроматографическую колонку, поддерживаемую при соответствующей температуре, и элюируют при помощи газа-носителя. Повторяют определение еще два раза. Измеряют площадь пика, или, если фактор симметрии находится в пределах 0 95 - 1 05, измеряют высоту пиков определяемого вещества или веществ и внутреннего стандарта. Если пик примеси имеет то же время удерживания, что и пик внутреннего стандарта, то при оценке результатов делается допуск на взаимное влияние этих компонентов друг на друга. На основании полученных данных: рассчитывают содержание определяемых веществ. [22]
Масса сорбита, добавляемая в анализируемую смесь, должна обеспечить его концентрацию в растворе, примерно соответствующую концентрации индивидуальных моносахаридов. Расчет ведут по градуировочному графику. График получают, по данным хроматографирования эталонных растворов, содержащих индивидуальный моносахарид и сорбит. Градуи-ровочный график строят в координатах: по оси абсцисс - масса чистого моносахарида в эталонном растворе, по оси ординат - отношение площади характеристического пика этого же моносахарида к площади пика внутреннего стандарта. График имеет линейную форму. Прямую линию проводят с использованием метода наименьших квадратов. [23]
В пробирку аккуратно отвешивают около 0 01 г парафина и добавляют ровно 0 1 мл раствора с точно известным количеством подходящего углеводорода с нечетным числом атомов углерода. Обычно используют н-нонадекан в концентрации от 0 25 до 0 50 %, в зависимости от типа образца. В хроматограф вводят 1 мкл этого раствора и задают такой же температурный режим, как и при анализе распределения по числу атомов углерода. Хроматографирование продолжают до выхода всех измеримых компонентов, причем желательно, чтобы максимальный пик занимал всю шкалу. Измеряют, как описано выше, площадь пика внутреннего стандарта ( например, н-нонадекана) и площадь пика наиболее тяжелого компонента. [24]