Плазмид

Cтраница 2

Малые плазмиды из рассмотрения были исключены, поскольку они не могли кодировать белок мол. [16]

Конъюгативные плазмиды ( Conjugative plasmids) Плазмиды, способные передаваться от одной клетки другой во время конъюгации. [17]

Плазмидный вектор, содержащий ген устойчивости к антибиотику ампициллину. Благодаря присутствию такого гена мы имеем возможность на среде с ампициллином отбирать клетки, несущие плазмиду. Клетки, не содержащие плазмиду, на такой среде погибают. [18]

Плазмиды несут ген, кодирующий фермент р-галактозидазу, причем этот ген дополнительно содержит несколько сайтов рестрикции, которые не влияют на функцию гена. Галактозидаза - это фермент, расщепляющий лактозу на галактозу и глюкозу. При действии данного фермента на бесцветное вещество X-gal образуется продукт голубого цвета. Если чужеродная ДНК встроена в сайт рестрикции внутри гена, то ген не будет работать. Поэтому, если бактерии, которые выросли в присутствии антибиотика, выращивать затем на среде с X-gal, то колонии, не содержащие донорной ДНК, будут окрашены в голубой цвет. [19]

Неконъюгативные плазмиды такой способностью не обладают. [20]

ДНК-лигаза Т4 образует фосфодиэфирные связи между 5 -фосфатными и З - гидроксильными группами в месте разрыва в остове двухцепочечной ДНК. А. Ли-гирование липких концов. Б. Дотирование тупых концов. [21]

Некоторые плазмиды представлены в клетке 10 - 100 копиями; они называются высококо-пийными. Низкокопийные плазмиды присутствуют в клетке в числе 1 - 4 копий. На долю плаз-мидной ДНК обычно приходится 0 1 - 5 0 % суммарной клеточной ДНК. Если две или более плазмиды не могут сосуществовать в одной и той же клетке, то говорят, что они принадлежат к одной группе несовместимости. Плазмиды, относящиеся к разным группам несовместимости, беспрепятственно существуют в одной клетке, независимо от числа копий. [22]

Помимо плазмид pBR322 и pUC, используется множество других векторов для клонирования, причем для некоторых из них существуют весьма остроумные системы отбора рекомби-нантных клонов. Один из векторов на основе pUC содержит ген, кодирующий белок, который убивает клетку. Клетка, несущая интактную плазмиду, на среде без ИПТГ не синтезирует суицидальный белок. Если в плазмиде присутствует вставка, а в питательную среду добавлен ИПТГ, то суицидальный белок продуцируется в неактивной форме, поскольку вставка, по всей вероятности, прерывает рамку считывания сиуцидального гена. Клетки с интактной плазмидой в присутствии ИПТГ синтезируют суицидальный белок и гибнут. Нетрансформированные клетки чувствительны к антибиотикам, в то время как реком-бинантные клоны несут ген, входящий в состав вектора, который обеспечивает их устойчивость к антибиотикам. Другими словами, в присутствии ИПТГ и антибиотика выживают только те клетки, которые несут плазмиду со вставкой. Один из суицидальных генов, который используется в таких системах отбора, кодирует фермент, препятствующий репарации двухце-почечных разрывов в хромосомной ДНК. Эти разрывы накапливаются, что влечет за собой гибель клеток. [23]

Очистка шлазмид-ной ДНК от РНК гель-фильтрацией на колонке сефакрила S-300. [24]

ДНК плазмиды очищали, как обычно, центрифугированием просветленного лизата и ультрацентрифугированием в градиенте CsCl с йодистым пропидием, потом удаляли последний многократной экстракцией бутанолом. [25]

Одни плазмиды несут специфичный сайт инициации репликации и могут реплицироваться только в клетках одного вида. У других плазмид этот сайт менее специфичен, и они реплицируются в самых разных бактериальных клетках. Соответственно различают плазмиды с узким и с широким спектром хозяев. [26]

Электронные микрофотографии плазмид, выделенных из двух видов бактерий. А. Плазмида pSClOl из Е. coli, которая придает клеткам устойчивость к тетрациклину. Б. Плаз-миды из Neisseria gonorrhoeae - бактерии, вызывающей гонорею. Большинство молекул находится в релаксированном состоянии. На примере скрученных сверхспиральных плазмид ( одна из них в центре фотографии видно, насколько эффективной может оказаться компактная уда-ковка кольцевой ДНК в результате отрицательных поворотов. [27]

Некоторые плазмиды несут гены, которые определяют устойчивость бактерии-хозяина к антибиотикам, например тетрациклину и стрептомицину. Бактерии, содержащие такие плазмиды, устойчивы к этим антибиотикам. При лечении бактериальной инфекции антибиотиком эти клетки могут выжить в организме человека, так как антибиотик убивает только чувствительные к нему клетки. Устойчивые к антибиотику клетки могут затем размножаться и вызывать инфекцию, которую нельзя сдержать антибиотиком. [28]

ДИК плазмиды колицииа LI, Считают, что эти формы образуются ил промежуточных молекул холидуепского типа, имеющих форму носьмерки, длина которых в дпа раза больше длины генома колицииа. Эти кпосьмеркк разрезаются рестректирующим ферментом Eco R1 ( разд. [29]

Две плазмиды разных групп несовместимости не мешают друг другу и могут стабильно сосуществовать в одной клетке. [30]

Страницы: 1 2 3 4 5