Оптическая плотность - элюат
Cтраница 2
Из данных, приведенных в табл. 1 и 2, видно, что в белках здоровых мочек как устойчивого к филлоксере сорта Рипа-рия X Рупестрпс 101 - 14, так и неустойчивого Шасла найдено 18 аминокислот. Судя по оптической плотности элюатов пятен, больших различий в содержании отдельных аминокислот в белках этих двух сортов не наблюдается. [16]
После проявления хроматограммы производные спиртов детектируются желтыми пятнами. Количественное определение проводят фотометрически по изменению оптической плотности окрашенных элюатов. [17]
Жидкостная хроматография под высоким давлением является модификацией колоночной хроматографии. Она обладает такими преимуществами, как автоматическая регистрация оптической плотности элюата, высокая разрешающая способность, быстрота разделения и пр. [18]
Для количественного определения кетостероиды переводили в производные 2 4-динитрофенилгидразона. Кент и Равич [196] элюировали эти производные и измеряли оптическую плотность элюатов при 390 им. [19]
После укола филлоксеры на мочковатых корешках винограда образуются корневые галлы. Как видно из табл. 1, в корневых галлах филлоксероустойчивого сорта оптическая плотность элюатов пятен отдельных аминокислот ( интенсивность окраски пятен) увеличивается неравномерно. В 15-дневных корневых галлах у аргинина, пролпна, аспарагиновой кислоты, серина, глицина, аланина, валпна, лейцина это увеличение происходит примерно в 2 раза, у лизина, глутаминовой кислоты, треонина, тирозина, фенплаланина - в 2 5 - 2 9 раза, у гистидпна - в 3 4, у метионина - в 3 7 раза. У цистеипа, триптофана и оксипролина наблюдается небольшое уменьшение. В 50-дневных корневых галлах происходит дальнейшее увеличение содержания аминокислот белка, о чем можно судить по усилению интенсивности окраски пятен. Это увеличение, как видно из табл. 1, происходит по отдельным аминокислотам неравномерно, что свидетельствует об изменении их соотношения в белках корневых галлов. Аминокислоты же - цистеин, аргинин, оксипролин, аспарагиновая и глутампновая кислоты п лейцин - остались без изменения по сравнению с 15-дневными корневыми галлами. [20]
ТСХ, однако количественную оценку с его помощью произвести трудно. Для этой цели носитель из области пятна соскребают ( из пластинки с пластиковой подложкой - вырезают), вещество элюируют и его количество определяют по оптической плотности элюата. [21]
Количество нуклеотида определяют по оптической плотности раствора при 260 нм, считая, что оптическая плотность 10 соответствует концентрации 1 мкмоль / мл. Элюирование прекращают, когда оптическая плотность элюата при 260 нм будет близка к нулю. Элюат упаривают в вакууме до малого объема и нуклеотид далее очищают бумажной хроматографией. [22]
На этой стадии может потребоваться использование перистальтического насоса. При этом элюируются различные примесные белки, а лак-татдегидрогеназа остается связанной с носителем. После того как через колонку пройдет 5 - 6 объемов буфера Б, оптическая плотность элюата при 280 нм начинает уменьшаться. Затем на колонку подают буфер В. После прохождения через колонку 1 - 2 объемов этого буфера определяют активность лактатдегидрогеназы в собираемых фракциях. Определяют активность лактатдегидрогеназы во фракциях элюата. Фракции, содержащие наибольшую активность, объединяют и добавляют к ним ЭДТА до конечной концентрации 1 мМ и мелкоизмельченный сульфат аммония для кристаллизации. [23]
 |
Зависимость площади пиков от концентрации нордигндрогвая-ретовой кислоты.| Зависимость оптической плотности элюатов от концентрации нордигидрогваяретовой кислоты. [24] |
Эти участки вырезали, мелко измельчали и заливали 5 мл метанола на 60 мил. К объединенному экстракту добавляли 5 мл 2 % - ного аммиачного раствора азотнокислого серебра и через 15 мин. Аналогичным путем определяется оптическая плотность элюатов с неизвестной концентрацией кислоты и по графику ( рис. 2) - концентрация кислоты в миллиграммах на 1 мл раствора. Опыты показали, что метод вымывания точнее метода определения плотности окраски, но последний менее трудоемок. [25]
Поскольку капроновый порошок способен к некоторому растворению в сильнополярных органических растворителях, нужно учитывать возможность появления в элюате следов капрона. Например, при обработке 1 г капронового порошка смесью метанол - диметилформамид ( 1: 1) растворяется 0 0038 г низкомолекулярного капрона. Поэтому совершенно необходимо предварительно обрабатывать капроновый порошок элюентиым составом растворителей. На рис. 16 показано, как повышается оптическая плотность элюата, если использовать не обработанный предварительно капроновый порошок. [27]
 |
Оптическая плотность элюатов с обработанного ( 1 и необработанного ( 2 смесью метанол-диметилформамид кап - [ IMAGE ] Удаление пятна с гтонко.| Элюцпя флавоноидов с капронового порошка. [28] |
Поскольку капроновый порошок способен к некоторому растворению в сильнополярных органических растворителях, нужно учитывать возможность появления в элюате следов капрона. Например, при обработке 1 г капронового порошка смесью метанол-диметилформамид ( 1: 1) растворяется 0 0038 г низкомолекулярного капрона. Поэтому совершенно необходимо предварительно обрабатывать капроновый порошок элюентным составом растворителей. На рис. 16 показано, как повышается оптическая плотность элюата, если использовать не обработанный предварительно капроновый порошок. [29]
Ригби и Бетьюн [94] в 1955 г. использовали ТСХ для изучения душистых веществ, содержащихся в хмеле, поскольку эти соединения определяют аромат и вкус пива. Курсива и Хашимото [95-103] исследовали лупу-лоны и гумулоны - горькие вещества, входящие в состав хмеля и пива. Поскольку для регулирования горького вкуса пива важно знать состав содержащихся в хмеле горьких веществ, эти авторы разработали хроматографический метод количественного их определения: пятна элюируют с хроматограммы и измеряют оптическую плотность элюатов гумулонов при 325 нм и элюатов лупулонов при 355 нм. Эти же авторы [104, 105] выясняли причины появления специфического привкуса у пива, находившегося на солнце, и установили, что этот привкус обусловлен появлением 3-метилбутен - 2-тиола - 1, образующегося, по-видимому, в результате реакции какого-либо сульфгидрильного соединения с продуктами разложения изогумулонов. [30]
Страницы: 1 2 3