Cтраница 3
Взаимосвязь между строением сорбатов и их величинами удерживания в этом режиме хроматографии весьма сложна, что не дает пока возможности создать универсальную, хотя бы и весьма приближенную, модель удерживания. Поэтому первоначальный выбор элюнрующей силы подвижной фазы в значительной степени зависит от интуиции и опыта хроматографиста, от того, насколько хорошо изучен данный класс веществ. При наличии достаточной информации для прогнозирования состава подвижной фазы может быть использован метод сравнительных расчетой. Он позволяет оценить, медленнее или быстрее будет элюироваться данное вещество, чем соединение, принятое в качестве прототипа. Однако часто даже и столь ограниченная модель отсутствует, и в выборе элюирующей силы для первого, пробного разделения остается руководствоваться эмпирическими правилами. При этом целью такого пробного разделения является не столько получение хроматограммы, непосредственно пригодной для анализа, сколько общая оценка подвижности компонентов и получение исходной информации для оптимизации элюирующей силы. [31]
Компонентом / может быть однозарядный ион слабого электролита, а компонентом 2 - любой одно -, двух - или многозарядный ион слабого электролита. Общий для всех фаз компонент 6 может быть ионом как сильного, так и слабого электролита. Образец растворяют в нижнем буферном растворе вместе со спейсерами, если таковые используются. Чтобы не тормозить миграции белков, в качестве носителя обычно выбирают полиакриламидный гель с низкой концентрацией. При установлении равновесия после приложения электрического поля все компоненты образца располагаются в виде стопки зон между фазами бета и дзета. Эта стопка слоев мигрирует как движущийся градиент рН постоянной ширины. Фазы альфа и дзета идентичны по составу, но их можно распознать, поскольку фаза дзета образуется внутри гелевой матрицы, где подвижности компонентов 1 и 6 могут несколько отличаться от их подвижно-стей в свободном растворе. [32]
На полоску фильтровальной бумаги, увлажненной буферным раствором, наносят в форме поперечной черточки или пятна исследуемый биоколлоидный раствор. Полоску помещают в горизонтальном положении в закрытое пространство, а концы ее погружают в буферный раствор, где находятся электроды. После подключения источника электродвижущей силы электрическое поле вызывает движение компонентов, находящихся в черточке или пятне, вдоль полоски. Скорость перемещения компонентов зависит от их электро-форетической подвижности. Через некоторое время электрофорез прекращают, бумагу высушивают и погружают в раствор красителя, который на биоколлоиде адсорбируется сильнее, чем на бумаге. В последнее время вместо бумаги используют гелеобразные среды ( агар-агар, желатин), которые дают более резко очерченные зоны. Кроме того, было установлено ( Шелудко, Константинов, Цветанов, 1959 г.), что, например, в - желатине не только сама электрофоретическая подвижность некоторых красителей меньше, чем в воде или водных растворах, но и соотношение между подвижностями компонентов в этом случае совсем иное. Эти особенности метода еще не до конца изучены. Поскольку рассматриваемый метод имеет важное практическое значение, различные проблемы создаваемой в настоящее время теории электрофореза в пористых и гелеобразных средах и разнообразные методы его использования являются предметом многих научных трудов. [33]