Cтраница 2
Устанавливают скорость тока жидкости 0 2 - 0 5 мл / мин на 1 см2 поверхности геля. Колонку трижды промывают 2 мл 0 02 М забуференного раствора NaCl, не содержащего мочевину. Затем вносят 5 мл стартового буфера и присоединяют колонку к системе для градиентной элюции ( см. с. В сосуд 2 наливают 250 мл стартового буфера, в сосуд 1 - 250 мл 0 3 М NaCl. Собирают фракции по 5 мл и определяют в них оптическую плотность при 260 нм. [16]
Все операции проводят при 4 С. Колонку размером 0 5 х 30 см заполняют BD-целлюлозой, суспендированной в стартовом буфере, состоящем из О. [17]
Согласно общему методу буферирования, ионит в Н - или ОН - - форме смешивают с первым элюирующим буфером. В результате катионит становится более кислым, а анионит более основным. После этого постепенно добавляют к катиониту буферную кислоту, а к аниониту буферное основание до тех пор, пока рН смеси не станет равным рН стартового буфера. После добавления каждой порции раствора следует выждать, пока установится равновесие ( время от времени перемешивая раствор), и измерить рН жидкого слоя над ионитом или рН фильтрата. После установления требуемой величины рН необходимо несколько раз промыть ионит элюирующим буферным раствором сначала методом декантации, а затем в колонке до тех пор, пока рН и электропроводность элюата не станут равными соответствующим характеристикам элюента. Последнее измерение следует проводить после длительного, лучше всего в течение ночи, выдерживания буфера в колонке. Только после этого можно считать, что ионит в колонке находится в равновесном состоянии. [18]
Устанавливают скорость тока жидкости 0 2 - 0 5 мл / мин на 1 см2 поверхности геля. Колонку трижды промывают 2 мл 0 02 М забуференного раствора NaCl, не содержащего мочевину. Затем вносят 5 мл стартового буфера и присоединяют колонку к системе для градиентной элюции ( см. с. В сосуд 2 наливают 250 мл стартового буфера, в сосуд 1 - 250 мл 0 3 М NaCl. Собирают фракции по 5 мл и определяют в них оптическую плотность при 260 нм. [19]