Электродный буфер
Cтраница 1
Электродный буфер - 0 04 М трис - HCl буфер, рН 7 5, содержащий 0 02 М ацетат натрия и 0 002 М ЭДТА. [1]
 |
Стойка для диск-электрофореза в капиллярах. [2] |
Электродный буфер, рН 8 5: 3 0 г триса, 14 4 г глицина растворяют в воде и доводят объем до 500 мл. Добавляют 1 каплю насыщенного раствора флуоресцеина. [3]
Электродный буфер - раствор № 1 разводят в 10 раз. [4]
Поверхность гелей промывают охлажденным электродным буфером и наносят по 10 - 50 мкг РНК в 0 02 - 0 05 мл электродного буфера, содержащего 10 % - ную сахарозу и 0 02 % - ный бромфеноловый синий. Для предотвращения денатурацион-ных изменений рибосомной РНК электрофорез проводят при 4 С. [5]
На слой исследуемого материала приливают электродный буфер. [6]
После нанесения образцов белка в трубочки наслаивают электродный буфер, затем заливают буфер в верхний резервуар. При использовании щелочных буферных растворов в них добавляют раствор бром-фенолового синего из расчета 0 5 - 1 мл красителя на 500 мл раствора, а в случае кислых буферов - метиленовый зеленый. Краситель маркирует движущийся пограничный слой во время электрофореза. [7]
Взвешивают агарозу ( 250 мг) и добавляют к ней 25 мл электродного буфера. Суспензию нагревают на кипящей водяной бане до получения прозрачного раствора, не содержащего пузырьков воздуха. Охлаждают агарозу до 40 С и осторожно заливают в предварительно прогретую кассету прибора для электрофореза ( с. Оставляют при комнатной температуре на 1 - 2 ч для полимеризации. [8]
 |
Стойка для диск-электрофореза в капиллярах. [9] |
Капилляры вводят через резиновую пробку толщиной 1 5 мм, вставленную в один конец стеклянной трубки диаметром 5 мм, содержащей электродный буфер. Другой конец капилляра помещен в стеклянный сосуд, содержащий тот же буфер. Электродами являются 0 5 мм платиновые проволочки. Таким образом, 5 образцов белка в 5 капиллярах анализируют за один опыт. Электрофорез ведут в холодильном шкафу или охлаждают капилляры вентилятором. Аппарат для микроразделения ( рис. 2) состоит из стойки для 5 установок. [10]
Поверхность гелей промывают охлажденным электродным буфером и наносят по 10 - 50 мкг РНК в 0 02 - 0 05 мл электродного буфера, содержащего 10 % - ную сахарозу и 0 02 % - ный бромфеноловый синий. Для предотвращения денатурацион-ных изменений рибосомной РНК электрофорез проводят при 4 С. [11]
После окончания полимеризации буфер с поверхности геля отсасывают и наносят образцы РНК, полученные одним из описанных выше методов, в объеме 0 01 - 0 05 мл. Раствор РНК разводят электродным буфером до концентрации 2 мг / мл и добавляют равный объем 40 % - ного раствора сахарозы. В электродные камеры заливают трис-ацетатный буфер ( рН 7 8), разведенный в 3 раза. Для предотвращения денатурационных изменений РНК разделение рекомендуется проводить при 4 С. [12]
В нем нет ни губок, ни прижимающего стекла. Пластинка Polygram CEL-300, упираясь в четыре выступа, изгибается так, что ее края оказываются погруженными в электродные буферы, а вся она находится в варсоле. [14]
Образцы исследуемых белков и белков-маркеров наносят на поверхность геля в объеме от 20 до 100 мкл ( каждого или смеси нескольких образцов) и осторожно наслаивают электродный буфер. Нагрузка на гель определяется методом окраски гелей, а также способностью того или иного белка связывать используемый краситель. Как правило, при электрофорезе в трубочках удается обнаружить от 20 до 100 мкг белка, при электрофорезе в пластинке - от 4 до 15 мкг. Электрофоре-тическое разделение проводят при комнатной температуре и силе тока 8 мА на трубочку. При этом сначала устанавливают силу тока - 2 мА на трубочку ( напряжение около 50 В), напряжение поднимают до 100 - 2ШКВ лишь после того, как образцы войдут в гель. [15]
Страницы: 1 2