Последовательность - нуклеотид
Cтраница 2
Интерес представляет своеобразный метод определения последовательности нуклеотидов в элюированных после первого этапа сравнительно коротких ( 10 - 15 звеньев) олигонуклеотидах, получивший название mobility shift analysis. Проводят неполный гидролиз каждого олигонуклеотида нуклеазой Р1 в алик-вотах в течение 2, 5, 10 и 20 мин. Эндонуклеаза Р1 атакует олиго-нуклеотид в любом месте, разрывая фосфодиэфирную связь между З - ОН и 5 -фосфатом. Она способна полностью гидролизовать олиго нуклеотид до 5 -монофосфатов, но условия и продолжительность гидролиза в аликвотах подбирают так, чтобы в результате получить набор всех возможных его фрагментов. При дальнейшем анализе ауторадиографически обнаруживаются только фрагменты, несущие 32Р, введенный на 5 -конец целого олигонуклеотида. При соблюдении указанных условий гидролиза полный набор таких меченых фрагментов содержит цепочки с любым числом звеньев ( п) - от [ 5 - 32Р ] моно-фосфата до целого [ 5 - 82Р ] олигонуклеотида. Важно подчеркнуть, что фрагмент каждой длины представлен только одной последовательностью нуклеотидов, начинающейся с меченного 32Р 5 -концевого нуклеотида. Все вырезанные из середины или прилегающие к 3 -концу олигонуклеотида фрагменты оказываются немечеными. [16]
Значительно более сложным является определение последовательности нуклеотидов в полимерной цепи нуклеиновых кислот. Для решения этой проблемы необходимо изыскание избирательных методов расщепления макромолекулы нуклеиновых кислот, что является одной из главных задач химии соединений этого класса. [17]
Значительно более сложным является определение последовательности нуклеотидов в полимерной цепи нуклеиновых кислот. Этот вопрос, чрезвычайно важный для дальнейшего изучения биологической роли нуклеиновых кислот, разработан пока недостаточно. Для решения этой проблемы необходимо изыскание избирательных методов расщепления макромолекулы нуклеиновых кислот, что является сейчас одной из главных задач химии этого класса соединений. В настоящее время определена последовательность нуклеотидов только для одной низкомолекулярной рибонуклеиновой кислоты. [18]
Значительно более сложным является определение последовательности нуклеотидов в полимерной цепи нуклеиновых кислот. Для решения этой проблемы необходимо изыскание избирательных М6ТОДОВ раО щепления макромолекулы нуклеиновых кислот, что является одной из главных задач химии соединений этого класса. [19]
Woese) на основании сравнения последовательностей нуклеотидов в рРНК малой субъединицы рибосомы, позволила выделить три группы организмов - Bacteria, Archaea, Eucarya - как три равноправных линии в графе отношений сходства в последовательностях рРНК и стала общепринятой догмой классификации, под которую подгоняются остальные характеристики. Свободноживущего организма, соответствующего Eucarya, но не имеющего симбиогенетических органелл, пока не обнаружено, хотя поиск его среди анаэробных протестов велся интенсивно. [20]
В образующемся продукте воспроизводится та же последовательность нуклеотидов, что и в ДНК-затравке. Этот факт был установлен в лаборатории Корнберга [18, 20] путем анализа ближайшего соседствования ( см. также стр. ДНК и всеми четырьмя дезоксирибонуклеозидтрифосфатами, причем один из них, например дАТФ, содержит Р32 в первом ( самом внутреннем) остатке фосфорной кислоты. В процессе синтеза новой ДНК Р32 образует мостик между нуклеозидом нашего меченого трифосфата ( А) и соседним ему нуклеотидом, содержащим неизвестное основание Z и находящимся на растущем конце поли-нуклеотидной цепи ( фиг. После завершения синтеза ДНК выделяют и расщепляют ДНК-азой из микрококков ( стр. [21]
Эта часть ДНК содержит повторяющиеся или многократно дублированные последовательности нуклеотидов. Наличие повторов в цепи ДНК высших организмов, а возможно и бактерий, имеет, по-видимому, глубокое функциональное значение и связано с явлениями регулирования процесса транскрипции. [22]
Генетический код, определяющий связь между последовательностью нуклеотидов в генетической ДНК и РНК и в информационных РНК и последовательностью аминокислотных остатков в белковой цепи. Проблема генетического кода, возникающая при атомно-молекулярном рассмотрении процессов биосинтеза белка, является физический. [23]
Эти гели находят применение также в определении последовательности нуклеотидов в ДНК, причем для детектирования в данном случае применяют лазерно-индуцируемую флуоресценцию. Гели непроницаемы для УФ-лучей с длиной волны меньше 250 нм. Кроме того, поскольку в распоряжении имеются очень малые пробы, в данном случае требуется очень высокая чувствительность детектора. [24]
 |
Схема устаноатения последовательности ДНК по Сэнгеру ( а. [25] |
В исходном варианте для изложенного метода определения последовательности нуклеотидов использовали дезоксинуклеозид-5 - трифосфат, меченный радиоактивными изотопами 32Р или 33Р в - положении трифосфатной группы. [26]
Их разделяют, анализируют нуклеотидную последовательность и реконструируют последовательность нуклеотидов в анализируемом фрагменте нуклеиновой кислоты. [27]
Для иллюстрации методов, применяемых с целью определения последовательности нуклеотидов, рассмотрим работу Кантони и его сотрудников [28, 49-52, 63], исследовавших s - PHK из печени кролика. [28]
Аминокислотная последовательность лрепроопиомеланокортнна быка, определенная на основании последовательности нуклеотидов его гена. [29]
 |
Рибонуклеазы, используемые для анализа последовательности РНК. [30] |
Страницы: 1 2 3 4