Cтраница 1
Нуклеотид-ная последовательность ДНК, регулирующая экспрессию гена, например промотор или оператор. [1]
Мутация, приводящая к появлению в мутантном гене нуклеотид-ной последовательности дикого типа. [2]
Для его осуществления необходимо знать: 1) точную нуклеотид-ную последовательность той области ДНК, которая соответствует мРНК - кодону, подлежащему изменению; 2) характер аминокислотных замен. Сначала выделяют одноцепочечную форму вектора ( плюс-цепь М13) и смешивают ее с синтетическим олигонуклеотидом, в точности комплементарным - за исключением одного нук-леотида - нужному сегменту клонированного гена. В случае, представленном на рис. 8.1, триплет АТТ, соответствующий изолейциново-му кодону AUU, нужно заменить на триплет СТТ, соответствующий лейциновому кодону CUU. Олигонуклеотид будет гибридизоваться с комплементарным участком клонированного гена в том случае, если: 1) он добавлен в количестве, во много раз превышающем количество ДНК М13; 2) неспаривающийся нуклеотид находится примерно посередине олигонуклеотида; 3) отжиг проводят при низкой температуре и высокой ионной силе. [3]
Эффективность синтеза белка зависит от наличия в его мРНК специфических нуклеотид-ных последовательностей. Чтобы предотвратить разрушение белкового продукта или обеспечить его секрецию, клонированные гены, которые кодируют этот белок, подвергают направленным изменениям. [4]
Необходимо подчеркнуть, что обязательным условием проведения полимеразной цепной реакции является знание нуклеотид-ной последовательности того или иного объекта исследования ( вирус, бактерия и др.) - В настоящее время в банках данных имеются практически полные сведения о геноме различных патогенных микробов. [5]
Эти исследования подтверждают и дополняют данные о нуклеотидном составе и степени гомологии нуклеотид-ных последовательностей ДНК энтеробактерий. [6]
К сожалению, никто не может дать гарантии, что в библиотеке представлена вся нуклеотид-ная последовательность нужного гена. [7]
Самый простой способ использования природной способности Ti-плазмид к генетической трансформации растений предполагает встраивание интересующей исследователя нуклеотид-ной последовательности в Т - ДНК, а затем использование Ti-плазмид и A. Однако, несмотря на то что Ti-плазми-ды являются эффективными природными векторами, имеется ряд серьезных ограничений на их использование в качестве векторов для клонирования. [8]
Согласно современным представлениям, каждому белку соответствует определенная информационная РНК, которая образуется под контролем ДНК таким образом, что ее нуклеотид-ная последовательность комплементарна нуклео-тидной последовательности одной из цепей ДНК и сама она ( данная информационная РНК) несет информацию, содержащуюся в некотором данном участке генетического материала. [9]
Все многочисленные виды зрелых молекул поздних аденовирусных мРНК содержат так называемую лидерную область, которая состоит из трех, а иногда из четырех весьма коротких нуклеотид-ных последовательностей, происходящих из отдаленных друг от друга участков 5 -концевого сегмента поздних первичных транскрип-тов. Обычно эта область в белок не транслируется; исключение составляет лишь относительно редко встречающийся четырехкомпо-нентный лидер, включающий последовательность i. Кодирующие районы расположены далее к З - концу - в теле мРНК - В разных молекулах мРНК, образовавшихся из транскриптов данного класса ( например, L1), это тело имеет разную длину, причем, как правило, ампутируются 5 -концевые последовательности тела. Такой способ генерации молекул мРНК представляется биологически весьма целесообразным, если учесть, что в клетках эукариот трансляция мРНК начинается преимущественно с первого от 5 -конца AUG-триплета. Поэтому в разных молекулах вирус-специфических мРНК данного класса роль инициирующего кодона выполняют разные AUG-триплеты, часто находящиеся в разных рамках считывания. Тем самым обеспечивается выражение компактно записанной генетической информации. [10]
Все многочисленные виды зрелых молекул поздних аденовирусных мРНК содержат так называемую лидерную область, которая состоит из трех, а иногда из четырех весьма коротких нуклеотид-ных последовательностей, происходящих из отдаленных друг от друга участков 5 -концевого сегмента поздних первичных транскрип-тов. Обычно эта область в белок не транслируется; исключение составляет лишь относительно редко встречающийся четырехкомпо-нентный лидер, включающий последовательность i. Кодирующие районы расположены далее к З - концу - в теле мРНК - В разных молекулах мРНК, образовавшихся из транскриптов данного класса ( например, L1), это тело имеет разную длину, причем, как правило, ампутируются 5 -концевые последовательности тела. Такой способ генерации молекул мРНК представляется биологически весьма целесообразным, если учесть, что в клетках эукариот трансляция мРНК начинается преимущественно с первого от 5 -конца AUG-триплета. Поэтому в разных молекулах вирус-специфических мРНК данного класса роль инициирующего кодона выполняют разные AUG-триплеты, часто находящиеся в разных рамках считывания. Тем самым обеспечивается выражение компактно записанной генетической информации. [11]
С разработкой в начале 80 - х гг. быстрых, эффективных и недорогих методов химического синтеза олигонуклеотидов появилась возможность использовать радиоактивно меченные олиго-нуклеотидные зонды для выявления различий между нуклеотид-ными последовательностями, в частности для обнаружения мутаций у человека. К тому времени было изолировано относительно небольшое число генов, главным образом в виде комплементарных ДНК ( кДНК), поэтому подбор зонда, гомологичного конкретному гену, представлял собой непростую задачу. [12]
Так или иначе транскрипция провируса начинается с копирования левого района г; заканчивается же она после считывания правого г. По одной из гипотез, для терминации транскрипции провируса важно, чтобы в синтезируемой молекуле РНК возникла шпилька на границе районов иЗ и г; имеющаяся здесь нуклеотид-ная последовательность образование такой шпильки позволяет. Ясно, что при транскрипции правого г шпилька образоваться может, а при транскрипции левого г - не может, поскольку в образующейся здесь РНК район иЗ просто не представлен. [13]
С помощью использования делеционных мутантов, продуцирующих мРНК без того или иного участка, удалось показать, что, например, белок S4 не репрессирует трансляцию соответствующей полицистроновой мРНК ( 4-ая сверху на рис. 118), если отсутствуют начало структурного гена белка S13 и предшествующая ему нуклеотид-ная последовательность. [14]
Архебактерии - это прока-риотические микроорганизмы, многие из которых обитают в экстремальных условиях: при высоких концентрациях солей или при высоких температурах, приближащихся к 100 СС. Анализ нуклеотид-ных последовательностей их рибосомных РНК показал, что архебактерии примерно одинаково далеко отстоят по своей эволюционной истории и от эукариот, и от обычных бактерий. У архебактерии не обнаружено множества форм РНК-полимераз, но по своему субъединичному составу их РНК-полимеразы похожи на РНК-полиме-разы эукариот: в их состав входит 8 - 10 субъединиц. Весьма четко прослеживается гомология больших субъединиц РНК-полимераз различных архебактерии с соответствующими субъединицами РНК-полимераз эукариот. [15]