Расплавленный агар
Cтраница 3
На крышке чашки восковым карандашом отмечают разведения. Затем в каждую чашку с суспензией вливают расплавленный столбик мяео-пептонного агара, заранее приготовленный и разлитый в пробирки ( 2 / з объема их) из расчета одни столбик на чашку. Температура расплавленного агара должна быть примерно 45 С. Ее устанавливают следующим образом: пробирку с расплавленным агаром прикладывают к щеке, если щека выдерживает температуру, столбик агара можно вылить в чашку Петри, Осторожным круговым вращением чашки агар перемешивают с суспензией. Чашки с застывшим агаром переворачивают вверх дном ( чтобы избежать попадания на поверхность агара конденсационной воды с крышки), и помещают в термостат при 28 - 30 С. [31]
Обычно реакцию ставят в плоском слое агарового геля, затвердевшего на дне чашки Петри. Сначала внутреннюю поверхность чашки Петри покрывают агаровой пленкой. Для этого ее наполняют 0 1 % - ным расплавленным агаром, затем сразу же агар выливают, а чашки переносят в эксикатор для полного высушивания. Другой вариант подобной процедуры состоит в том, что покрывают дно чашки Петри слоем 1 % - ного расплавленного агара толщиной примерно 1 мм. В качестве консерванта в агар следует добавить мертиолат. [32]
Фильтрацию воды через мембранный фильтр проводят без фильтровального прибора. Необходимый объем воды при помощи пипетки постепенно и равномерно наносят на поверхность мембранного фильтра, помещенного в чашку Петри на подкладку из нескольких слоев стерильной фильтровальной бумаги, которая впитывает воду, прошедшую через мембранный фильтр. Мембранный фильтр затем пинцетом перекладывают на чашки Петри с питательным агаром с 0 0005 % ТТХ. ТТХ вводят в расплавленный агар перед его использованием. ТТХ в питательном агаре выполняет роль красителя для окрашивания колоний и получения достаточной контрастности, что облегчает и ускоряет подсчет. Для большей точности результатов счет колоний целесообразно проводить с помощью стереоскопического микроскопа. [33]
Как уже упоминалось, ковалентная посадка НК на матрицу может оказаться непригодной для создания аффинного сорбента с индивидуальной специфичностью, поскольку многие основания поли-нуклеотидной цепи будут заблокированы химической связью с носителем. По этой причине широкой популярностью пользуются различные методы нековалентной фиксации НК на матрицах. Исторически они были разработаны значительно раньше, но до сих пор не утратили своего значения. Около половины внесенных в расплавленный агар молекул ДНК после его затвердевания оказываются столь надежно запутанными в сеть геля, что не выходят из него даже цосле длительной промывки. [34]
Обычно при биоавтографическом методе используют лотки, в которые заливают агар с тест-микробом. Дном лотка служит лист стекла или плексигласа, к которому приклеивают или прикрепляют при помощи винтов боковые стенки. Кроме того, предложена модификация биоавтографического метода, при которой лотки не требуются. В этом случае хроматограммы погружают в расплавленный агар, засеянный тест-микробом, и затем вынимают из агара и инкубируют во влажной камере. [36]
С и смешивают с 0 5 мл 3 % - ного расплавленного агара ( приготовленного на дистиллированной воде), охлажденного до 40 С. Нагретой пипеткой эту смесь заливают в лунку, сделанную в агаре. После внесения образцов оставшееся в лунках пространство заполняют 1 5 % - ным агаром, приготовленным на буферном растворе. Необходимо следить за тем, чтобы расплавленный агар был полностью свободен от пузырьков воздуха. [37]
На крышке чашки восковым карандашом отмечают разведения. Затем в каждую чашку с суспензией вливают расплавленный столбик мяео-пептонного агара, заранее приготовленный и разлитый в пробирки ( 2 / з объема их) из расчета одни столбик на чашку. Температура расплавленного агара должна быть примерно 45 С. Ее устанавливают следующим образом: пробирку с расплавленным агаром прикладывают к щеке, если щека выдерживает температуру, столбик агара можно вылить в чашку Петри, Осторожным круговым вращением чашки агар перемешивают с суспензией. Чашки с застывшим агаром переворачивают вверх дном ( чтобы избежать попадания на поверхность агара конденсационной воды с крышки), и помещают в термостат при 28 - 30 С. [38]
Обычно реакцию ставят в плоском слое агарового геля, затвердевшего на дне чашки Петри. Сначала внутреннюю поверхность чашки Петри покрывают агаровой пленкой. Для этого ее наполняют 0 1 % - ным расплавленным агаром, затем сразу же агар выливают, а чашки переносят в эксикатор для полного высушивания. Другой вариант подобной процедуры состоит в том, что покрывают дно чашки Петри слоем 1 % - ного расплавленного агара толщиной примерно 1 мм. В качестве консерванта в агар следует добавить мертиолат. [39]
После затвердения агара его подравнивают по контуру пластинки и полосок фильтровальной бумаги с помощью лезвия бритвы или острого скальпеля. Для дальнейшей обработки пластинку помещают на специальную подставку, например деревянный брусок или коробочку, имеющую ширину и высоту приблизительно 10 см. После того как пластинку приподнимут, прикрепленные к ней с обеих сторон и покрытые сверху агаром бумажные полоски будут свисать под прямым углом. При закреплении пластинки в электро-форетической камере эти полоски погружаются в буферный раствор. Чтобы обеспечить равную электропроводность во всех участках агарового слоя, необходимо восстановить его целостность в местах перегиба бумажных полосок на краях пластинки. Это делают в последнюю очередь, осторожно заливая пипеткой расплавленный агар в те места, где произошло повреждение слоя. [40]
Основной трудностью при изучении бактериальных аэрозолей является отсутствие идеального пробоотборника, с помощью которого можно было бы точно измерить число бактерий в 1 см3 воздуха и распределение частиц-бациллоносителей по размерам. Для определения концентрации живых бактерий в воздухе необходимо осадить их на питательную среду, дать вырасти колониям и сосчитать их. Хотя многие микроорганизмы могут быть отобраны теми же методами что и частицы обычных аэрозолей ( см. главу 7), в некоторых случаях следует серьезно позаботиться о том, чтобы процесс отбора проб не оказал вредного влияния на жизнеспособность микроорганизмов. Для спор вполне пригодна фильтрация, но большая часть вегетативных форм при фильтрации через сухой фильтр погибает. Следует также указать на прямое осаждение бактерий на слой агара133 ш или в жидкость, откуда затем отбирается определенная часть 126 172, смешивается с расплавленным агаром и выливается в чашки Петри. В обоих случаях колонии подсчитываются спустя определенный инкубационный период при благоприятной для изучаемых микроорганизмов температуре. [41]
Основной трудностью при изучении бактериальных аэрозолей является отсутствие идеального пробоотборника, с помощью которого можно было бы точно измерить число бактерий в 1 см3 воздуха и распределение частчц-бацилло-носителей по размерам. Для определения концентрации живых бактерий в воздухе необходимо осадить их иа питательную среду, дать вырасти колониям и сосчитать их. Хотя многие микроорганизмы могут быть ыобраны теми же методами что и частицы обычных аэрозолей ( см. главу 7), в некоторых случаях следет серьезно позаботиться о том, чтобы процесс отбора проб не оказал вредного влияния на жизнеспособность микроорганизмов. Для спор вполне пригодна фильтрация, ио большая часть вегетативных форм при фильтрации через сухой фильтр погибает. Для не очень чувствительных к внешним условиям микроорганизмов хорошие результаты получаются при использовании милли-поровых фильтров И. Следует также указать на прямое осаждение бактерий иа слой агара133 134 или в жидкость, откуда затем отбирается определенная часть 126 - 172, смешивается с расплавленным агаром и выливается в чашки Петри. В обоих случаях колонии подсчитываются спустя определенный инкубационный период при благоприятной для изучаемых микроорганизмов температуре. [42]
Страницы: 1 2 3