Белковая примесь
Cтраница 2
 |
Хроматографирование активной. [16] |
На рис. 4 представлена хроматограмма активных фракций ЕКТЕОЛА-целлюлозы на ДЕАЕ-целлюлозе. Из рисунка видно, что основная масса неактивных белков выходит в первом пике, лецитиназа элюируется при концентрации хлорида натрия, 0 25 N. По белковому составу этот пик неоднороден. В его первых фракциях содержатся белковые примеси, имеющие несколько меньшее сорбционное сродство к целлюлозе, чем лецитиназа. Удельная активность их невелика. Затем элюируются фракции с большей удельной активностью. [17]
Результаты приведенных выше опытов не позволяют еще решить, играет ли роль антигенов активная молекула фермента пли сопутствующие примеси белкового характера. Для того чтобы ответить на этот вопрос, были поставлены опыты в двух различных направлениях: 1) иммунизация очищенным ферментом и 2) иммунизация ипактивированным ферментом. Мы исходили из следующих соображений: если роль антигена играет активная молекула фермента, то иммунизация очищенными препаратами должна привести к таким же активным иммунным сывороткам, как и с неочищенными препаратами, а при иммунизации инактивированным ферментом вообще нельзя ожидать, что получится иммунная сыворотка. Наоборот, если антигенами являются белковые примеси, то антиферментативные свойства иммунной сыворотки должны быть тем слабее, чем чище препарат, применяющийся для иммунизации. [18]
После измельчения ткань экстрагируют той или иной жидкостью. Таким путем можно легко получить, например из мышечной ткани, весь комплекс ферментов гликолиза ( см. стр. Хорошим растворителем для большинства ферментов является глишуин. Глицериновые экстракты отличаются стойкостью, представляют мало-подходящую для развития бактерий среду и содержат лишь небольшое количество посторонних белковых примесей. Полученные путем настаивания с измельченными органами водные или глицериновые вытяжки отделяют затем от частиц ткани фильтрованием или центрифугированием. [19]
Фракционная термоденатурация основывается на следующих предпосылках. Известно, что температурный коэффициент денатурации очень высок; он значительно выше, чем для любого другого химического превращения, величина его может составлять 60 - 80 - 100 и даже более. Поэтому температура, вызывающая разрушение нативной структуры, достаточно четко отграничена и различна для каждого отдельного белка. Быстрой и полной коагуляции способствует наличие в системе нескольких различных белков и многих небелковых примесей. Так, если использовать специфический стабилизирующий эффект субстрата, то систему иногда удается нагреть на 10 С выше той температуры, при которой фермент будет денатурирован без субстрата. Выпадающий осадок может быть от-центрифугирован и отброшен. В качестве примера фракционной термоденатурации можно привести выделение оксидазы, проведенное Варбургом и Христианом. Белковые примеси из препарата удалялись нагреванием при 60 С в течение 15 мин. [20]
Страницы: 1 2