Cтраница 2
Сначала было изучено потенциометрическое титрование. Это было необходимо в связи с тем, что любое маленькое различие в окраске пробы с образцом и пробы холостого опыта в визуальной конечной точке вызывает при работе с субмикроколичествами значительные ошибки, хотя в случае макроколичеств ошибки титрования при этом ничтожно малы. Было изучено влияние на конечную точку титрования различных объемов и ионной силы среды, а также было проведено сравнение потенциометрических и визуальных конечных точек. [16]
Сначала было изучено потенциометрическое титрование. Это было необходимо в связи с тем, что любое маленькое различие в окраске пробы с образцом и пробы холостого опыта в визуальной конечной точке вызывает при работе с субмикроколичествами значительные ошибки, хотя в случае - макроколичеств ошибки титрования при этом ничтожно малы. Было изучено влияние на конечную точку титрования различных объемов и ионной силы среды, а также было проведено сравнение потенциометрических и визуальных конечных точек. [17]
К 1 5 мл раствора гептозы ( 10 - 25 у / мл) добавляют 3 мл концентрированной соляной кислоты, содержащей 0 05 % гексагидрата хлорного железа, и 0 2 мл свежеприготовленного 6 % - ного спиртового раствора орсина, дважды перекристаллизованного из бензола. Если реакционную смесь нагревать только 3 мин, альдогептозы, как и кетогептозы, дают зеленую окраску с максимумом поглощения при 585 - 595 ммк против пробы холостого опыта. [18]
К 1 мл раствора с концентрацией сахара 20 - 250 у 1мл добавляют 2 мл реагента, приготовленного смешиванием: 10 мл 10 % - ного раствора дифениламина ( дважды перекристаллизованного из 70 % - ного спирта) в абсолютном спирте с 90 мл ледяной уксусной кислоты и 100 мл концентрированной соляной кислоты. Реакционную смесь нагревают 10 - 30 мин на кипящей водяной бане. Проба холостого опыта, которая содержит 1 мл воды вместо раствора сахара, имеет только слабый зеленоватый оттенок. [19]
К 2 мл раствора сахара с концентрацией 50 у 1мл или более добавляют 7 мл реагента, приготовленного растворением 50 г борной кислоты в растворе 230 мл воды и 770 мл концентрированной серной кислоты. Одновременно ведут обработку пробы холостого опыта с водой вместо раствора сахара. Реакционную смесь и пробу холостого опыта нагревают 20 мин на кипящей водяной бане, охлаждают текущей водопроводной водой и оставляют на 30 мин при комнатной температуре. Поглощение подчиняется закону Вера, и это можно использовать для количественного определения углеводов. Реакция применяется главным образом для определения углеводов гликопротеи-нов, которые не дают полос вблизи области максимума поглощения. Максимум поглощения в холостом опыте достигает только 0 05, что соответствует приблизительно содержанию в-глюкозы 0 7 у / мл. [20]
Реакционную смесь погружают в водопроводную воду, затем точно на 90 сек в водяную баню с температурой 60, немедленно охлаждают водопроводной водой и добавляют 0 2 мл 0 1 % - ного раствора карбазола. Появляется слабая пурпурная окраска; через 1 час проводят измерение оптической плотности при 535 ммк. Одновременно определяют оптическую плотность соответствующего стандартного раствора и пробы холостого опыта. [21]
Пробу холостого опыта приготовляют, смешивая 1 мл дистиллированной воды с 10 мл хромотропового реагента. Пробирки нагревают 30 мин на кипящей водяной бане, закрыв их, когда они станут горячими. После охлаждения измеряют величину поглощения для образца с формальдегидом против пробы холостого опыта при 570 ммк. Реакционная смесь формальдегид - хромотроповая кислота обесцвечивается медленно. [22]
Неодинаковая окраска отдельных гексоз обусловлена различным поглощением при 605 ммк и в интервале; 390 - 412 ммк, где имеется второй максимум. Оптическая плотность раствора при 605 ммк пропорциональна концентрации гексозы только при условии, что она выше 100 у / мл. При использовании вторичной реакции с L-цистеином для количественного определения необходимо поэтому добавлять к пробе холостого опыта, к стандартному раствору и к испытуемой пробе по 100 у в-маннозы, чтобы обеспечить соответствующий уровень концентрации сахара. [23]
При помощи автотрансформатора повышают силу тока до 0 05 айв течение 2 мин. Затем открывают щель спектрографа, ток в течение 30 сек. На одной и той же фотопластинке в одинаковых условиях фотографируют по 3 раза спектры проб угольных концентратов и эталонов в порядке возрастания их концентрации, а также спектры проб холостых опытов. Съемку производят с применением конденсора с F 75 мм, помещенного на расстоянии 165 мм от электрода и 125 мм от щели спектрографа. [24]
Большинство Сахаров реагирует с тиогликолевой и серной кислотами, как описано выше, образуя окрашенные соединения. Но только п-глюкуроновая кислота и глюкурониды способны отчетливо изменять окраску в этой реакции, если в растворе присутствует в-манноза. D-Галактуроновая кислота и полисахариды, содержащие в-маннуроно-вую, ь-идуроновую или L-гулуроновую кислоты, не дают характерной розовой окраски, если в растворе присутствует в-манноза. В то же время гиалуроновая кислота и хондроитинсульфат реагируют как эквивалентные количества в-глюкуроновой кислоты. Гепарин не вступает в эту реакцию. Если в растворе в большом количестве присутствуют пентозы, розовая окраска появляется даже в отсутствие в-маннозы. Глюкуро-новую кислоту можно легко обнаружить по спектрофотометрическим измерениям. В этом случае пробу испытуемого вещества, приготовленную с добавлением в-маннозы, нагревают одновременно с пробой холостого опыта, содержащей в-маннозу и воду вместо раствора в-глюкуроновой кислоты, и затем измеряют оптическую плотность раствора при 510 и 480 ммк по отношению к пробе холостого опыта. [25]