Cтраница 4
Некоторые ограничения дансильного метода снизаны с использованием достаточно жесткого кислотного гидролиза; при этом имеет место разрушение остатков триптофана и деза минирование остатков аспарагина н глутамина. ДНС-амннокислотами образуются ДНС-дипелтиды, что осложняет идентификацию. В этом случае целесообразно увеличить продолжительность гидролиза до 2 - 3 суток. [46]
На рис. 1.6 приведены кривые, характеризующие скорость гид-релиза карбида грануляции 2 / 8 при начальных температурах воды 2, 17, 40 и 60 С. Полученные данные показывают, что продолжительность гидролиза карбида при начальных температурах воды 2 и 17 С примерно одна и та же и составляет 5 5 - 6 5 мин. При на-чальных температурах 40 и 60 С продолжительность гидролиза снизилась до 2 - 2 5 мин. [47]
Следует подчеркнуть, что у целлюлоз разного происхождения продолжительность гидролиза до ПСП различна и обычно уменьшается в следующем порядке: хлопковая целлюлоза техническая древесная целлюлоза мерсеризованная целлюлоза регенерированная целлюлоза. Именно в этом порядке уменьшается степень упорядоченности и увеличивается доступность целлюлозы и, следовательно, скорость гидролиза. Поэтому при гидролизе различных, особенно малоизученных, образцов целлюлозы продолжительность гидролиза до ПСП следует устанавливать экспериментально. [48]
Как видно из данных таблицы, в большинстве случаев окисление 2-алкокси - А5 - дигидропиранов до глутаровых кислот протекает с высокими выходами. Исключение составляют 2-бутокси -, 2-этокси - 4-фенил-и 2-бутокси - 4-фенил - А5 - дигидропираны, для которых выходы соответствующих глутаровых кислот аномально малы. Это связано, по-видимому, с тем, что указанные дигидропираны с трудом подвергаются гидролизу. При увеличении продолжительности гидролиза этих соединений-наблюдается сильное осмоление, а выход глутаровых кислот остается-низким. [49]
Как видно из данных таблицы, в большинстве случаев окисление 2-алкокси - А5 - дигидропиранов до глутаровых кислот протекает с высокими выходами. Исключение составляют 2-бутокси -, 2-этокси - 4-фенил-и 2-бутокси - 4-фенил - А5 - дигидропираны, для которых выходы соответствующих глутаровых кислот аномально малы. Это связано, по-видимому, с тем, что указ-анные дигидропираны с трудом подвергаются гидролизу. При увеличении продолжительности гидролиза этих соединений, наблюдается сильное осмоление, а выход глутаровых кислот остается-низким. [50]
Интерес представляет своеобразный метод определения последовательности нуклеотидов в элюированных после первого этапа сравнительно коротких ( 10 - 15 звеньев) олигонуклеотидах, получивший название mobility shift analysis. Проводят неполный гидролиз каждого олигонуклеотида нуклеазой Р1 в алик-вотах в течение 2, 5, 10 и 20 мин. Эндонуклеаза Р1 атакует олиго-нуклеотид в любом месте, разрывая фосфодиэфирную связь между З - ОН и 5 -фосфатом. Она способна полностью гидролизовать олиго нуклеотид до 5 -монофосфатов, но условия и продолжительность гидролиза в аликвотах подбирают так, чтобы в результате получить набор всех возможных его фрагментов. При дальнейшем анализе ауторадиографически обнаруживаются только фрагменты, несущие 32Р, введенный на 5 -конец целого олигонуклеотида. При соблюдении указанных условий гидролиза полный набор таких меченых фрагментов содержит цепочки с любым числом звеньев ( п) - от [ 5 - 32Р ] моно-фосфата до целого [ 5 - 82Р ] олигонуклеотида. Важно подчеркнуть, что фрагмент каждой длины представлен только одной последовательностью нуклеотидов, начинающейся с меченного 32Р 5 -концевого нуклеотида. Все вырезанные из середины или прилегающие к 3 -концу олигонуклеотида фрагменты оказываются немечеными. [51]