Диацилглицерин
Cтраница 2
 |
Специфичность фосфолипаз. [16] |
В большинстве случаев, если не во всех, в процессе может участвовать также находящийся в мембране сопрягающий G - или N-белок ( гл. Другим продуктом расщепления фосфатидилино-зитдифосфата фосфолипазой С является диацилглицерин ( DAG) - второй важный посредник, активирующий протеинки-назу С [8] ( гл. [17]
При этом фракционный состав липидов, а также соотношение отдельных жирных кислот в липидах будут различны. В липидах дрожжей, выращенных по белковому режиму, в 3 раза больше фосфоглицеридов, в 4 - стеринов, в 2 - моно - и диацилглицеринов и в 2 раза - свободных жирных кислот, но значительно меньше триацилглицеринов и стериновых эфиров. Дрожжи, выращиваемые по жировому режиму, синтезируют больше ненасыщенных жирных кислот. [18]
Растительные масла являются жирами семян или плодов различных растений, получаемыми прессованием или извлечением с использованием растворителей. Растительные масла состоят главным образом ( на 95 - 97 %) из триацил-глицеринов - органических соединений, сложных полных эфиров глицерина, а также моно - и диацилглицеринов. [19]
Хроматография на носителях, содержащих ионы серебра, используется также для разделения sn-l 2 ( 2 3) - или 5д - 1 3-диацил-глицеринов. Поскольку фракционирование зависит от общего числа двойных связей и их распределения в остатке жирной кислоты, находящейся в положении 1 или 2 молекулы глицерина, в результате ТСХ можно получить более одной фракции, которые будут содержать соединения с одинаковой степенью ненасыщенности. Перед проведением ТСХ рекомендуется модифицировать свободные диацилглицерины, так как они могуг изомеризоваться при хроматографии на носителях, содержащих ионы серебра. [20]
Добавляя в систему растворителей для ТСХ триметилборат можно - предотвратить изомеризацию ацилглицеринов [157], Изомеризации моно - и диацилглицеринов на пластинках с си-ликагелем проще всего избежать, если проводить хроматогра-фирование не самих ацилглицеринов, а соответствующих производных. Моно - и диацилглицерины можно перевести в ацетаты или трег-бутилдиметилсилиловые эфиры. Ацетаты, моно - и диацилглицеринов по хроматографическим свойствам сходны с триацилглицеринами, содержащими остатки коротко-цепочечных жирных кислот. Вначале проводят двукратное элюирование ( по 18 -см каждое) первой системой, после чего элюент меняют. [21]
Собственно синтез триацилглицеринов осуществляется в несколько этапов. На первой стадии происходит ацили-рование свободных гидроксильных групп глицерофосфата двумя молекулами КоА - производного жирной кислоты - и образование L-фосфатидной кислоты. На второй стадии от фосфатидной кислоты отщепляется неорганический фосфат и образуется диацилглицерин. [22]
Следует отметить, что пики, соответствующие ТМС-эфи-рам, можно разделять также на коротких колонках с неполярной жидкой фазой. Пики ТМС-эфиров диацилглицеринов перекрываются с пиками, соответствующими диалкилглицеринам. Для разделений такого типа удобны ацетильные производные, поскольку смеси диалкил -, алкилацил - и диацилглицеринов или диацил -, алкилацил и алк-1 - енилацилглицери-нов легко разделяются в виде ацетатов. Как и в случае триацил-глицеринов, при ГЖХ диацилглицеринов не наблюдается значи-тельного размывания зон, что проявляется на хроматограмме в виде узких пиков. [23]
Строение жиров было установлено еще в начале XIX века на основании их гидролиза, приводящего к глицерину и смеси кислот. Бертло ( 1854) синтезом Жироподобного вещества из глицерина и смеси кислот. В природных жирах всегда присутствует небольшое количество ( до 5 %) примесей: свободных кислот, моно - и диацилглицеринов, витаминов и др. Свойства жиров существенно зависят от строения кислот, входящих в состав триацилглицеринов. [24]
Соединения, подвергнувшиеся однократному деацилированию с отщеплением только одного остатка жирной кислоты, называют лизофосфатидиловыми эфирами. Фосфолипазы AI и Ад вызывают удаление одной ацилыюй группы с образованием лизофосфатиди-лового эфира. Препарат фосфолипазы В содержит оба эти фермента. Под действием фосфолипазы С из фосфоглицерида образуется диацилглицерин и эфир фосфорной кислоты, а под действием фосфолипазы D - фосфатидная кислота и соответствующий спирт. [25]
Следует отметить, что пики, соответствующие ТМС-эфи-рам, можно разделять также на коротких колонках с неполярной жидкой фазой. Пики ТМС-эфиров диацилглицеринов перекрываются с пиками, соответствующими диалкилглицеринам. Для разделений такого типа удобны ацетильные производные, поскольку смеси диалкил -, алкилацил - и диацилглицеринов или диацил -, алкилацил и алк-1 - енилацилглицери-нов легко разделяются в виде ацетатов. Как и в случае триацил-глицеринов, при ГЖХ диацилглицеринов не наблюдается значи-тельного размывания зон, что проявляется на хроматограмме в виде узких пиков. [26]
Биосинтез фосфолипидов происходит из глицеро-3 - фосфата через его диацильный эфир - фосфатидовую кислоту. Из фос - фатидовой кислоты при действии СТР образуется активированная СМР-фосфатидовая кислота, которая затем этерифициру-ется серином с образованием фосфатидилсерина и инозитом - с образованием фосфатидилинозита. Декарбоксилирование фосфатидилсерина ферментом, содержащим пиридоксальфосфат, приводит к образованию фосфатидилэтаноламина, который метилируется затем по аминогруппе S-аденозилметионином до фосфатидилхолина. С другой стороны, серии, этаноламин и хо-лин могут при действии СТР образовывать активированные производные, дающие затем при реакции с диацилглицерином фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламин и фосфатидилхолин. Метилирование фосфатидилэтаноламина двумя молекулами ме-тилтрансферазы стимулируется определенными нейромедиато-рами и является важной стадией передачи сигнала через клеточную мембрану. [27]
Наиболее широко используемым методом является, однако, адсорбционная хроматография ( колоночная или тонкослойная) на оксиде кремния или промытом кислотой флорисиле. Для количественной оценки используют гравиметрию или газожидкостную хроматографию входящих в состав анализируемого образца жирных кислот ( после введения внутреннего стандарта); при анализе с помощью тонкослойной хроматографии применяют также ден-ситометрию или флуориметрию. Нейтральные липиды элюируют с колонки хлороформом, гликолипиды - ацетоном, фосфолипиды - метанолом. Нейтральные липиды затем разделяют на второй колонке с оксидом кремния: углеводороды элюируют чистым гекса-ном; сложные эфиры холестерина - гексаном, содержащим 2 % эфира; триацилглицерины - гексаном с 5 % эфира; холестерин и диацилглицерины - гексаном с 15 % эфира; моноацилглицери-ны - чистым эфиром. [28]
Позднее многие исследователи модифицировали систему, заменяя петролейный эфир на н-пентан, м-гексан или н-гептан, а уксусную кислоту - на муравьиную, однако существенно улучшить разрешение им не удавалось. В таких системах, используемых для фракционирования нейтральных липидов, мо-ноацилглицерины и фосфолипиды остаются на старте, в то время как наименее полярные углеводороды мигрируют вблизи фронта растворителя, а более или менее полностью разделяются липиды с промежуточной полярностью. Шараф и др. [146] успешно разделяли сложные смеси нейтральных липидов методом ТСХ по такой схеме: сначала элюирование проводили гексаном до продвижения фронта растворителя до отметки 19 см от стартовой линии, после чего гексан заменяли на бензол. Когда фронт растворителя перемещался еще на 19 см, пластинку из бензола переносили в систему гексан - диэтиловый эфир - уксусная кислота ( 70: 30: 1), где после прохождения фронтом растворителя 9 см заканчивали элюирование. На полученной в результате хрома-тограмме наблюдались разделенные зоны сквалена, сложных зфиров холестерина, восков, диоловых эфиров и метиловых эфиров, ацетонидов простых эфиров глицерина, жирных кислот, холестерина и диацилглицеринов. [29]
Жиры или триацилглицерины практически не всасываются в пищеварительном тракте. В тонком кишечнике происходит их гидролиз, который катализируется липо-литическими ферментами, вырабатываемыми поджелудочной железой. Существует несколько типов панкреатиче-ческих липаз. Одни из них специфичны в отношении эфирных связей в ос-положений триацилглицерина, а другие гидролизуют связи в ( 3-положении. Полный гидролиз тр и аци л глицеринов происходит постадийно: сначала ферментами атакуются а - и о - связи, а затем более медленно гидролизуются р-моноацилглицерины. Конечные продукты переваривания ( глицерин, высшие жирные кислоты, а также диацилглицерины и моноглицерины) всасываются в стенки кишечника. [30]
Страницы: 1 2