Cтраница 2
Фосфорилирование 2 3 - О-изопропилиденовых производных уридина, цитидина [89] и 9 - р - О-рибофуранозилпурина [99] дибензилхлорфосфатом с последующим удалением защитных групп приводит к соответствующим 5 -фосфатам. Производные гуанозина оказались несколько более устойчивыми к действию реагентов такого типа. Так, например, при действии на 2 3 - О-изопропилиденгуанозин тетра-п-нитрофенилпирофосфата ( образуется непосредственно в процессе реакции в результате взаимодействия ди-п-толилкарбодиимида и ди-п-нитрофенилфос-форной кислоты) получается 2 3 - О-изопропилиденгуанозин - 5 -ди-п - нитрофенилфосфат, причем реагент является достаточно мощным и не требует присутствия катализатора. При щелочном гидролизе в мягких условиях удаляется одна n - нитрофенильная группа; для удаления второй группы требуются более жесткие условия, при которых может происходить дефосфорилирование в качестве побочного процесса. Обработка моноарилнуклеотида змеиным ядом ( диэстеразой) оказалась более эффективным средством, причем присутствующая в яде 5 -моноэстераза была неактивна и не расщепляла получающийся нуклеотид вследствие наличия в нем 2 3 - О-изо-пропилиденовой блокирующей группировки. [16]
Другим примером может служить факт более легкого протекания фосфорилирования 2 3 - О-изопропил-иденаденозина по сравнению с аналогичными производными 6-диме-тиламинопурина [97] и гуанина [94] при действии мягкого реагента, такого, как дибензилхлорфосфат. При обработке иодидом натрия [98] или бромидом лития 5 - О-алкил ( или арил) сульфонилзамещен-ных нуклеозидов основного характера образуются соли цикло-нуклеозидов, а 5 -сульфонилоксигруппа в уридине, тимидине или инозине замещается на галоген. Эта реакция, обычно указывающая на образование эфира у первичной гидроксильной группы, не имеет такого значения в применении к нуклеозидам с тех пор, как при помощи этого метода были получены 2 -иод - 2 -дезоксиуридин и З - иод ( или бром) - 3 -дезокситимидин, по-видимому, через стадию промежуточного образования циклонуклеозидов. Каталитическое восстановление галогендезоксинуклеозидов приводит к соответствующим дсзоксисоединениям. Этот метод был использован не только для синтеза встречающихся в природе 2 -дезоксинуклеози-дов, но также для получения 5 -дезоксиуридина [75, 99], З - дезокси-тимидина, 5 -дезокситимидина и 3 - 0 - 0 - 2 3 5 -тридезоксирибофу-ранозилтимина ( 3 5 -дидезокситимидина) [66], причем последний был получен ступенчатым каталитическим восстановительным дегалогенированием 3 5 -дибром - 3 5 -дидезокситимидина. [17]
Разработаны также и другие методы, в которых защищенный динуклеозидфосфат фосфорилируется по единственному свободному гидроксилу сахара. При кислотной обработке З - О-ацетилтими-дилил - 5: 3 - ( 5 - О-тритил) тимидина в мягких условиях удалялась тритильная группа, а фосфорилированием получившегося З - О-аце-тилтимидилил - 5: З - тимидина дибензилхлорфосфатом с последующим щелочным гидролизом и удалением бензильных групп с помощью гидрирования был получен тимидилил-5: 3 -тимидин - 5 -фосфат. Для синтеза изомерного динуклеотида, содержащего концевую З - моноэтерифицированную фосфатную группу, описанное промежуточное полностью защищенное соединение обрабатывали щелочью, в результате чего образуется тимидилил-5: 3 - ( 5 - О-три-тил) тимидин. Фосфорилирование и удаление защитных групп приводит затем к тимидилил-3: 5 -тимидин - 3 -фосфату. Как и при полимеризации тими-дин-5 - фосфата, здесь, вероятно, образуются промежуточные мета-фосфаты. [18]
При частичном ацетилировании 2 -дезоксиаденозина ( или лучше, 3 5 -ди - О-ацетил - 2 -дезоксиаденозина) была получена смесь ацетатов, из которой с помощью противоточного распределения были выделены два моноацетата. Таким образом, моноацетат, полученный с меньшим выходом, был идентифицирован как З - О-ацетилдезоксиаденозин, и, следовательно, другой изомер был 5 - О-ацетилдезоксиаденозином. Фосфорилирование З - О-ацетилдезоксиаденозина дибензилхлорфосфатом привело к ди-бензилфосфату, из которого под действием раствора аммиака в метиловом спирте удалялись ацетильная и одна бензильная группа и был получен 2 -дезоксиаденозин - 5 -бензилфосфат. В результате гидрогенолиза в буферном ( рН 7) водном растворе ( чтобы избежать разрыва гликозидной связи) образуется дезоксиаденозин-5 - фосфат. [19]