Cтраница 1
Проназа хорошо растворяется в воде, разбавленных солевых растворах, в 50 % - ных охлажденных водных растворах ацетона и спиртов. При температуре ниже 40 протеазы проназы устойчивы в интервале рН 6 0 - 9 0; при рН4 0 и 10 0 они быстро инактивируются. [1]
Проназа довольно устойчива к действию температуры. В присутствии субстрата термостабильность проназы значительно возрастает. [2]
Протелин, проназа и протеазы Actinomyces 771 гидролизуют многие глобулярные и некоторые фибриллярные белки. Гидролиз идет преимущественно до аминокислот, содержание которых в гидролизатах достигает 70 - 80 % от количества белка, взятого для исследования. Протофрадин гидролизует в различных белках 36 - 65 % пептидных связей, но основными продуктами гидролиза являются олигопептиды, а количество аминокислот не превышает 30 - 35 %, что заметно отличает проюфрадин от протелина и других препаратов и, по-видимому, свидетельствует о малой активности содержащихся в протофрадине пептидаз. [3]
Протелин, подобно проназе, расщепляет проколлаген из шкуры теленка. Действие протелина на проколлаген значительно глубже действия трипсина. При отношении фермент: субстрат 1: 10, температуре 30 и продолжительности протеолиза 24 часа протелин расщепляет в монрмере коллагена ( молекулярный вес 260000) 21 пептидную связь, в то время как трипсин гидролизует только три связи. [4]
Так же, как проназа, протелин и протофрадин, эти протеазы обладали пептидазной активностью, эстеразными активностями трипсина и химотрипсина, эластазной активностью, а также способностью гидроли-зовать коллаген. Ионы кальция предохраняют протеазы от инактивации. [5]
Как было отмечено выше, проназа обладает чрезвычайно широкой специфичностью. [6]
Наличие сходства между протелином и проназой вполне объяснимо, если учесть, что продуцентами этих протеиназ являются разные штаммы актиномицетов, относящихся к одному роду и виду. [7]
Таким образом, исследование показало, что проназа содержит большое число ( 11 - 13) индивидуальных протеиназ, различающихся по специфичности и свойствам. При фракционировании проназы были выделены аминопептидазы, нейтральные протеиназы, щелочные протеиназы с трипсиновой, химотрипсиновой и эластазной активностями. [8]
Необходимо отметить, что между протелином и проназой существует большое сходство. Это сходство проявляется в высокой аротеоли-тической активности препаратов, в близких рН - оптимумах активности и стабильности этих препаратов, в числе и специфичности содержащихся в них протеиназ. Протелин подобен проназе также по глубине гидролиза различных белков и по стабильности в растворах мочевины. [9]
Некоторые качественные и количественные различия между протелином и проназой [46], отмечаемые при сопоставлении результатов фракционирования проназы и протелина на КМ-целлюлозе, могут быть следствием разных условий выращивания продуцентов и выделения препаратов, а также результатом не вполне тождественных условий их фракционирования. Характерным является отсутствие в протелине карбокси-пептидазы. [10]
Из других методов отделения основных белков можно назвать обработку проназой, добавление NaC104 к буферу для депротеинизации, центрифугирование в градиенте плотности, колоночную хроматографию; однако пи один из них по простоте и эффективности не сравним с фильтрацией через мембранные фильтры. [11]
Следует отметить, что эластаза проназы исследована в значительно меньшей степени, чем другие щелочные протеиназн проназы, и делать какие-либо окончательные выводы о свойствах и специфичности этого фермента пока преждевременно. [12]
Так, при температуре не выше 20 - 25 трипсин, пепсин, фицин и проназа расщепляют внутримолекулярные связи в молекулах кислоторастворимого коллагена, но полипептидные цепи тройной спирали молекулы коллагена при этом не затрагиваются. При действии тех же протеаз на нерастворимый коллаген шкуры теленка разрушаются межмолекулярные связи, соединяющие молекулы коллагена латерально и по их концам, что приводит к растворению коллагена. При этом образуются пептиды с не типичной для коллагена последовательностью аминокислот, названные телопептидами. Телопептиды составляют 1 - 5 % от всей молекулы коллагена: они не содержат оксипролина и оксилизина; в них меньше, чем в коллагене, глицина и аланина, значительно больше тирозина, лейцина, фенилаланина, аспарагиновой и глютаминовой кислот. [13]
Интересно, что этот токсин действует только на внешней стороне мембраны, в то время как проназа влияет на процесс инактивации изнутри аксона ( с. По-видимому, АТХ проникает довольно глубоко в мембрану; наличие в молекуле токсина длинных гидрофобных последовательностей подтверждает эту точку зрения. [14]
Хроматография проназы на КМ-целлюлозе и очистка полученных фракций на ссфадексах и различных ионообменниках показала, что в проназе содержится не менее трех щелочных протеиназ, ишибируемых диизоиро-иилфторфосфатом. [15]