Cтраница 2
Существует несколько способов получения меченых органических соединений. Прежде всего, радиоактивный изотоп может быть введен в молекулу исследуемого соединения в процессе прямого химического синтеза этого соединения из исходных продуктов, один из которых содержит радиоактивный изотоп. Прямой химический синтез является основным методом, с помощью которого можно обеспечить введение радиоактивной метки в строго определенное положение в молекуле. Для получения меченых соединений используют также специфические радиохимические методы ( изотопный обмен, метод атомов отдачи) и биосинтез. С помощью изотопного обмена в ряде случаев удается получать соединения, меченные радиоактивным изотопом в определенном положении; использование других методов синтеза приводит, как правило, к получению соединений, в молекулах которых радиоактивную метку может нести любой из атомов данного элемента. [16]
Рассмотрим теперь совсем недавний пример разделения ДНК и РНК. Здесь решалась более тонкая задача разделения НК, соизмеримых по своим размерам, а именно очистки ДНК плазмиды pBR 322 от примеси РНК. Присутствие РНК в препаратах плазмидной ДНК мешает протеканию некоторых ферментативных реакций и затемняет результаты введения концевой радиоактивной метки. Оказалось, что даже интенсивная обработка РНКазой ( 50 мкг / мл, 37, 1 ч) не расщепляет РНК полностью, а лишь дробит ее на фрагменты, не обнаруживаемые электрофорезом в 1 % - ном геле агарозы ( они уходят вперед), но переосаждающиеся этанолом вместе с плаз-мпдной ДНК, Кроме того, обработка РНКазой вообще нежелательна. [17]
Результаты этой работы показывают, что если известен механизм обрыва, то с большой точностью можно выполнить и обратную задачу: определение среднечисловой молекулярной массы. Однако сложность механизмов протекания процессов полимеризации виниловых мономеров, а-олефинов и диенов затрудняет правильную интерпретацию полученных результатов и ограничивает использование методов, основанных на введении радиоактивной метки на стадии инициирования или обрыва реакции роста. [18]
Измерение коэффициентов диффузии полимеров связано со значительными экспериментальными сложностями. Так как процесс протекает с очень небольшой скоростью, многие из рассмотренных методов определения коэффициента диффузии оказываются неприменимыми. В работах [172, 479, 480] приведены результаты измерения коэффициента диффузии меченного тритием полиизопрена и натурального каучука в натуральный каучук. Расчеты показали, что увеличение молекулярного веса на порядок приводит к понижению коэффициента диффузии на два порядка. Эксперименты, описанные в работе [478], свидетельствуют о том, что увеличение молекулярного веса диффузанта ( бутадиен-винилпиридинового каучука ДМВП-15) на два порядка приводит к увеличению коэффициента диффузии также на два порядка. Однако принятая в [478] методика введения радиоактивной метки путем обработки раствора ДМВП-15 раствором HG136 не вполне надежна. В табл. III.1 приведены заимствованные из литературы результаты измерения коэффициентов диффузии и самодиффузии высокомолекулярных соединений. [19]
Электрофорез на геле и крахмале применяют для аналитических целей. Наиболее важным применением гель-электрофореза является иммуноэлектрофорез. Для этого вида анализа используют макропористые гели, в частности гели агара и агарозы. Метод иммуноэлектрофореза основан на том, что после разделения электрофорезом происходит диффузия разделенных веществ - антигенов - в направлении, перпендикулярном направлению электрофореза. Навстречу этим соединениям диффундируют антитела. При соединении антигенов и антител образуются характерные дуги осаждения. Метод иммуноэлектрофореза очень чувствителен при обнаружении антигенов, специфических для данных антител. В настоящее время применяют метод введения радиоактивной метки в антигены, благодаря чему радиоиммуноэлектрофорез является одним из самых чувствительных методов анализа биополимеров. [20]