Cтраница 3
Гидролиз индофенилацетата при концентрации выше 0 2.10 - 4 М протекает по реакции нулевого порядка, и самописец ЭПП-09 дает кинетическую прямую, тангенс угла наклона которой равен скорости реакции. В пределах концентраций эфира 0 2 - 10 - 3 6.10 - 4 М торможения холинэстеразы субстратом не наблюдается. Таким образом, применяя буферный раствор достаточной емкости для поддержания постоянства рН), по скорости гидролиза индофенилацетата можно автоматически измерять активность холинэстераз в разных условиях при минимальной затрате времени ( продолжительность реакции для получения кинетической прямой 1 - 2 мин. [31]
Сосуд-смеситель с растворами выдерживают в течение 10 мин при 32 С и приступают к фото-метрированию. Измерения проводят с зеленым светофильтром ( длина волны 500 нм) в кювете с толщиной слоя 1 см на правом барабане. Через 15 - 20 мин после включения фотоколориметра в сеть устанавливают гальванометр на нуль нейтральными клиньями, поместив предварительно кюветы с водой в оба пучка света и поставив правый барабан на нуль оптической плотности. Устойчивость нулевого положения проверяют в течение 5 - 10 мин. После подготовки прибора к измерениям переворачивают сосуд смеситель, одновременно включая секундомер, и перемешивают растворы встряхиванием. Полученным раствором заполняют кювету и помещают ее в правое плечо фотоэлектроколориметр а. Первый раз измеряют светопоглощение через 1 мин после начала реакции ( после включения секундомера) и затем через каждые 15 - 30 с. Интервалы времени зависят от скорости реакции: чем сильнее отклоняется стрелка гальванометра, тем чаще следует производить отсчеты, с тем чтобы за время измерений оптическая плотность уменьшилась не более чем на 40 % своей первоначальной величины. На основании полученных данных строят кинетическую прямую, как описано выше, определяют изменение светопоглощения за 1 мин ( tg ax) и по калибровочному графику находят количество микрограмм йода в 5 мл раствора. [32]