Cтраница 1
Пятна аминокислот приобретают в результате реакции с нингидрином фиолетовый цвет. Интенсивность окраски зависит от концентрации аминокислоты и сравнивается со шкалой. На основе сравнения определяют содержание аминокислоты в гидролизате. [1]
Пятна аминокислот обнаруживают, погружая хроматограммы в реактив ( см. ниже); развитие окраски доводят лишь до минимума, необходимого для отграничения пятен. [2]
При этом измеряют поперечную полосу, содержащую пятна определенной аминокислоты в различных количествах. По сравнению с методом Хайса и Франца [2] этот метод дает вполне объективные результаты; стандартная смесь может отличаться от состава анализируемого образца в большей степени, нежели в первоначальном методе Кейла [2], и получающиеся результаты можно рассматривать как абсолютные значения, а не как процент от общего содержания аминокислот. [3]
Перед проявлением хроматограмму высушивают 5 мин при 104 - 110 С, затем опрыскивают N-CN - индикатором: пятна аминокислот становятся видимыми после повторного 1 - 2-минутного нагревания при 105 С. [4]
Для идентификации аминокислот пригодны оба сорта бумаги, для количественного анализа лишь ленинградская медленная, вторая дает диффузные и трудно эл юируемые пятна аминокислот. [5]
При первом методе хроматограммы опрыскивают 0 02 % - ным раствором нингидрина в ацетоне, нагревают в течение 5 - 7 минут при температуре 80, слабоокрашенные пятна аминокислот обводят карандашом, вырезают из бумаги и кладут в пробирки. КОН для удаления следов аммиака и содержимое пробирок высушивают в вакуум-эксикаторе в течение ночи. Этот избыток кислоты необходим для нейтрализации внесенной ранее щелочи. Кроме того, в пробирки вливают по 0 4 мл 5 % - ного раствора нингидрина в метилцеллосольве и 2 мл 0 0002 М раствора KCN в метилцеллосольве. Пробирки нагревают в течение 30 минут на кипящей водяной бане, затем охлаждают в ледяной воде в течение 10 минут и пурпурно-фиолетовую жидкость количественно переносят в градуированные пробирки. [6]
Иначе при хроматографировании обнаружатся пятна аминокислот из вашего пота. [7]
Наконец, по третьему способу положение пятен аминокислот и пептидов можно определить, используя флуоресценцию аминокислот под действием ультрафиолетовых лучей. На влажной хро-матограмме при этом видны бледнофиолетовые пятна аминокислот на общем темнофиолетовом фоне флуоресценции. [8]
При необходимости можно провести количественное определение некоторых аминокислот в исследуемом образце, например аланина и глицина, которые хорошо отделяются от других аминокислот. После окончания электрофореза, прокрашивания и фиксации вырезают пятна соответствующих аминокислот и обрабатывают их так, как описано на с. Колориметри-рование проводят при 500 нм и строят график зависимости оптической плотности от количества внесенной аминокислоты. Используя полученный график, определяют содержание глицина и аланина в исследуемом образце. [9]
Пятна идентифицированных аминокислот нарезались на полоски и элюировались 10 мл 60 % водного этанола на кипящей водяной бане в течение 1 мин. [10]
Пятна идентифицированных аминокислот нарезались на полоски и элюировались 10 мл 60 % водного этанола на кипящей водяной бане в течение 1 мин. [11]
При разделении аминокислот во втором направлении хроматографию также ведут до тех пор, пока растворитель не поднимется по пластинке на 5 см, тогда ее вынимают, высушивают при 105 С до полного исчезновения запаха фенола ( под тягой. Высушенную пластинку опрыскивают раствором нингидрина и снова прогревают в течение нескольких минут в сушильном шкафу при 100 - 105 С. Па пластинке появляются пятна аминокислот красновато-фиолетового или сине-фиолетового цвета. [12]
Лист бумаги помещают в кювету так, чтобы пятна аминокислот были на расстоянии 2 - 3 см от края кюветы. [13]
Хорошие результаты получаются при погружении хроматограмм ( методика, описанная Хейнсом) в смесь, состоящую из 125 мг нингидрина в 25 мл ледяной уксусной кислоты, 20 мл коллидина и 955 мл этилацетата. Раствор должен быть свежеприготовленным; для фенольных хроматограмм к реактиву перед использованием добавляют немного гидриндантина. В спиртовом растворе нингидрина, содержащем коллидин в виде свободного основания, пятна аминокислот окрашиваются в различные цвета в зависимости от времени развития окраски и температуры. [14]
Силуфол на расстоянии 1 5 - 2 см от краев и 1 5 см между пятнами. Камеру предварительно насыщают парами растворителя. Пластинки высушивают под тягой. Пятна дипептидов выявляют, опрыскивая пластинку раствором нингидрина ( с. Затем пластинки высушивают в струе теплого воздуха и выдерживают при 70 С в течение 10 мин. Пятна аминокислот проявляются при комнатной температуре, пятна дипептидов - при нагревании. [15]