Cтраница 2
Концентрация и коэффициент экстинкции должны быть выражены в одной системе единиц. На практике измеряют как оптическую плотность, так и пропускание. Удельное поглощение ( экстинкцию) находят в предварительных экспериментах на образцах с известной концентрацией анализируемого вещества. Знание этой величины необязательно в случае использования калибровочных графиков. Толщина поглощающего слоя в зависимости от величины коэффициента экстинкции и концентрации поглощающей примеси может изменяться в широких пределах: от сотых долей миллиметра до нескольких десятков сантиметров. [16]
Присутствие белков в высоких концентрациях усиливает поглощение при 492 ммк, но максимум поглощения соответствует большим длинам волн. Влияние этих примесей можно почти полностью исключить; для этого после завершения реакции реакционную смесь встряхивают с равным объемом хлороформа. Чтобы удалить эмульгированный хлороформ из водной фазы, жидкость центрифугируют или оставляют на ночь для отстаивания [9] и спектрофотометрируют водную фазу. Оптическая плотность, обусловленная гексозамипом, возрастает примерно на г / 3 по сравнению с первоначальной. Точность количественного определения увеличивается при применении дихроматических измерений при 492 и 520 ммк. Разность D l &2 - - Одго только на 25 % меньше, чем Dig2, и является линейной функцией концентрации гсксозамина. Величина коэффициента экстинкции для D-галактозамина на 5 % меньше его величины для в-глюкозамина. [17]