Разделение - липид
Cтраница 1
Разделение полярных и неполярных липидов обычно выполняют методом адсорбционной или распределительной хроматографии. При этом, как правило, фосфолипиды отделяют от нейтральных липидов и свободных жирных кислот. Если в исходной смеси присутствуют гликолипиды, их обнаруживают во фракциях, содержащих липиды промежуточной полярности. [1]
Для разделения липидов в качестве сорбента используют обычно си-ликагель. В качестве связующего вещества применяют гипс. [2]
Другим распространенным методом разделения неполярных и полярных липидов является анионообменная хроматография на DEAE - или ТЕАЕ-целлюлозе. Нельсон [20] детально изучили практические аспекты анионообмен-ной хроматографии липидов, в частности методику заполнения колонки и выбора растворителя. Смесью хлороформ - метанол ( 2: 1), содержащей 1 % - ную уксусную кислоту, элюируют фосфатидил-этаноламины, а уксусной кислотой - фосфатидилсерин. Для элюирования кислых фосфолипидов используют смесь хлороформ - метанол ( 4: 1), содержащую 0 1 М аммоний-ацетатный буфер. Фракцию церамидполигексозидов можно получить достаточно чистой, если провести элюирование смесью хлороформ - метанол ( 2: 1), а затем удалить фосфатидилхолины и сфинго-миелины. [3]
Многие работы по разделению липидов, выполняемые с помощью обычной ТСХ, могут быть выполнены на патентованных стержневых носителях - хромародах, и в этом случае возможна детектирование всех липидов посредством пламенно-ионизационного детектора. [4]
Кроме того, существует разделение липидов на простые и сложные. К простым липидам относят соединения, которые можно расщепить на два соединения; сложными считают липиды, распадающиеся при расщеплении на более, чем два вещества. [5]
Приготавливая хроматографические пластинки для разделения бактериальных липидов, Минникин и Абдолрахимзаде [168] смешивали 40 г силикагеля Merck PF254 и 100 мл 0 2 % - ного раствора ацетата натрия в виде кашицы и наносили на подложку. На таком слое при элюировании смесью хлороформ-метанол - вода ( 65: 25: 4) фосфатидилглицерин дает компактное пятно; на непропитанных слоях пятно этого соединения вытянуто. Для разделения фосфолипидов и гликолипидов, содержащихся в растениях, Ле-паж [169] также применял двумерную ( под углом 90) хроматографию. Под действием первой смеси происходило удовлетворительное разделение фосфолипидов, вторая смесь была более эффективна при разделении гликолипидов и сопутствующих им гликозидов стерина. Пластинки сначала опрыскивали 0 5 % - ным раствором периодата натрия и оставляли на 5 мин, после чего выдерживали в атмосфере диоксида серы, чтобы удалить избыток периодата натрия, затем опрыскивали 0 5 % - ным раствором n - розанилина ( свежеобесцвеченного диоксидом серы) и оставляли до появления синих и пурпурных пятен. [6]
Целью хроматографии липидов являются разделение липидов различных классов и последующее получение индивидуальных соединений с целью их идентификации и количественного анализа. В ходе изучения липидов с помощью хроматографиче-ских методов выяснилось, что многие организмы, ткани, клетки и субклеточные компоненты имеют характерный состав липидов, который можно определить, не прибегая к полному разделению и получению индивидуальных соединений. Количественный анализ липидов, полученных в результате частичного разделения первичного экстракта, часто является достаточным для установления источника, из которого были выделены эти липиды, и выяснения, с каким метаболическим состоянием ( нормальным или аномальным) связан данный состав этих соединений. Практически все хроматографические методы могут быть применимы для выполнения этой задачи, однако более предпочтительны те, которые сочетают быстрое разделение с эффективной количественной оценкой. Такой подход имеет широкое применение - от определения полного состава липидов плазмы до характеристики индивидуальных липидов бактерий, основанной на анализе метиловых эфиров жирных кислот этих липидов или продуктов пиролиза последних. [7]
 |
Разделение нейтральных липидов и продуктов их гидролиза методом адсорбционной ХТС на силикагеле Г. [8] |
На рис. 70 схематическипоказано разделение отдельных типичных липидов на классы соединений. [9]
 |
Разделение нейтральных липидов и продуктов их гидролиза методом адсорбционной ХТС на силикагеле Г. [10] |
На рис. 70 схематически показано разделение отдельных типичных липидов на классы соединений. [11]
 |
Элюирование соединений из колонки с оксидом кремния. [12] |
В табл. 12.4 дана схема разделения липидов на отдельные группы. [13]
 |
Схема газохроматографического анализа метиловых эфиров жирных кислот после предварительного разделения методом ХТС продуктов присоединения ацетата. [14] |
Недавно стал известен общий метод разделения липидов: ненасыщенные соединения образуют с ионами серебра комплексы, имеющие различную растворимость. [15]
Страницы: 1 2 3