Cтраница 3
Силикагели, импрегнированные нитратом серебра ( № 38, 73, 74, 78, 79), с успехом применяют для разделения липидов, эфиров жирных кислот, цис, / npawc - изомеров, веществ с различной степенью ненасыщенности ( d е V г i e s В. [31]
Нейтральные липиды и свободные жирные кислоты можно разделить на соединения, принадлежащие к различным классам, с помощью модификации хроматографических систем, предназначенных для разделения неполярных и полярных липидов. Обычно в этих целях применяют ТСХ, однако достаточно часто используют и адсорбционную, и распределительную колоночную хроматографии, особенно если требуется разделить большие количества вещества. [32]
В качестве растворителя, как правило, применяют смеси петролейного и диэтилового эфиров. Для разделения сильно полярных липидов на слоях силикагеля Г используют спиртовые и водные растворители, поэтому фракционирование подобных соединений на отдельные классы часто происходит по механизму распределения, а не адсорбции. [33]
По хроматографическим свойствам силикаты магния близки к силикагелям ( см. разд. Применяют их для разделения липидов, гликозидов, ацетилиро-ванных Сахаров, азотсодержащих веществ, алкалоидов, нуклеотидов, углеводородов, терпенов, стероидов, витаминов, пестицидов, канцерогенных веществ и др. Наибольшую популярность приобрел флорисил - силикат магния со сравнительно низким содержанием окиси магния. Элюотропный ряд растворителей для адсорбционной хроматографии на флорисиле дан в разд. [34]
При приготовлении смешанных элюентов важно обратить внимание на точную дозировку компонентов, поскольку даже небольшие изменения состава смеси могут привести к изменению величин Rf и к изменению разделения исследуемой смеси. Так, Никольс [26] нашел, что при разделении липидов с применением растворителей на основе смеси диизобутилкетона и уксусной кислоты редко удавалось добиться удовлетворительного разделения, если в смеси присутствовало больше четырех частей воды. В то же время смесь, содержащая 3 6 - 3 8 частей воды, оказалась наилучшим элюентом для обычных разделений. В настоящей книге везде состав смесей приведен в объемных единицах, за исключением специально оговоренных случаев и тех случаев, где явно напрашивается массовое соотношение, например для смесей адсорбентов. [35]
Липофильный сефадекс LH-20 применяют для ГПХ и адсорбционной хроматографии при разделении липидов, стероидов, ароматических и циклических соединений и других высокомолекулярных веществ. [36]
Триглицериды и менее полярные липиды ( см. рис. 70) обычно можно разделить в соответствии с длиной цепи и степенью ненасыщенности, применяя ледяную уксусную кислоту или ацетонитрил, которые содержат до 10 % воды. Хорошими растворителями для фракционирования слабо полярных классов липидов являются также смеси хлороформ - метанол с 5 % воды и смеси ацетона или метилэтилкетона с ацетонитрилом. Для разделения полярных липидов в соответствии с длиной цепи и степенью ненасыщенности пригодна смесь: ледяная уксусная кислота - ацетонитрил, а также смеси ледяной уксусной кислоты и ацетонитрила или тетрагидрофурана с 10 - 50 % воды. Сильно полярные липиды, например алкилсульфаты или четвертичные аммонийные основания, фракционируют на целлюлозе с водным этанолом в качестве растворителя. [37]
Илинов [406] предложил для разделения метиловых эфиров жирных кислот использовать в качестве сорбента силикагель, пропитанный сульфаматом серебра. Это позволяет получать при проявлении более интенсивно окрашенные зоны, чем при использовании только силикагеля. Элюирование в этом случае осуществляется смесью н-гексан - петролейный эфир - диэтиловый эфир-уксусная кислота ( 35: 12: 2: 1) при температуре 12 - 15 С. Суль-фаминовая кислота не влияет на разделение липидов. [38]
Хроматографиче-ское устройство состоит из нескольких-аппаратов ( давление на входе 1 4 атм), обеспечивающих непрерывные серии градиентных изменений н-пентана, диэтилового эфира, хлороформа и метанола, содержащего 8 % аммиака. Колонка была заполнена ко-расилом П ( 37 - 55 мкм), модифицированным обработкой 28 % - ным раствором аммиака. Таким путем была разделена следующая группа стандартных липидов: метиловый эфир олеиновой кислоты, глицерин олеиновой кислоты, холестерин, 1 3 - и 1 2-диолеиновые эфиры глицерина, 1-моноолеиновый эфир глицерина, цереброзиды бычьего мозга, фосфатидилэтаноламина, фосфатидилхолина и сфингомиелины бычьего мозга. Этот же метод был использован для разделения липидов, находящихся в клетках эритроцитов крыс. [39]
Глицериды и соли жирных кислот составляют основную часть относительно нерастворимых органических веществ в сточных водах. Значительную часть нерастворимых органических загрязнений составляют липидоподобные вещества, в том числе стерины и углеводороды. Липиды и липидоподобные вещества нерастворимы в воде и труднее разлагаются при обработке сточных вод, чем углеводы и белки. Поэтому значительные количества липидов минуют водоочистные сооружения и вносят заметный вклад в состав органических загрязнений поверхностных вод. Имеются весьма скудные сведения о превращениях относительно малорастворимых органических веществ ( таких как липиды и липидоподобные вещества или жиры), которые попадают в поверхностные воды частично из городских и промышленных стоков. Для лучшего понимания процессов разложения липидов и путей их удаления в установках для обработки сточных вод и природной воды нужно иметь аналитические методы для разделения липидов на классы и идентификации отдельных соединений в загрязненной воде. [40]
При выборе адсорбента и растворителя для решения конкретной задачи методом ТСХ экспериментатор может исходить из своего предыдущего опыта в колоночной и бумажной хроматографии и их модификациях, например распределительной хроматографии. Наиболее известен ряд Траппе [1]; время от времени публикуются варианты этого ряда. В действительности эти ряды несколько меняются в зависимости от типа адсорбента и разделяемых соединений. Кауфман и Мейкус [4] приводят следующий ряд растворителей ( перечислены в порядке увеличения элюирующей способности) для разделения липидов: ксилол, толуол, бензол, трихлорэтилен, дихлорэтилен, метилен-хлорид, хлороформ, изоамиловый эфир, изопропиловый эфир, диэтиловый эфир, ацетон и диоксан. [41]
Связующее ( предположительно) типа аэросила, внебольшом количестве. Кизельгур ( в соотношении 1: 1) добавлен для ускорения разделения. Пластины № 19 отличаются повышенной скоростью движения растворителя, также пластины № 118 - 128, 185 и разд. Пластины с крупнозернистым сорбентом. ФИ - силикат кальция, активированный РЬ и Мл. Пластины в индивидуальной герметичной упаковке. Органическое полимерное связующее допускает использование всех обычных проявителей ( в том числе H2SO4) с нагреванием до 130 С. Рекомендованы для разделения липидов различных классов методом двумерной хрома -: тографии ( R о user G. Отсутствие связующего облегчает извлечение веществ из пятен для колориметрического анализа. Для разделения и анализа лецитинов и сфингомиелинов. Самопроявляющиеся пластины: обугливающий реактив включен в слой сорбента. Для проявления хроматрграммы нужно нагреть пластину до 80 - 120 С. [42]