Cтраница 3
Для получения в индивидуальном состоя-ии свободных моносахаридов и разделения продуктов гидролиза метили-юванных полисахаридов наибольшее применение находит распредели-ельная хроматография на колонках с целлюлозой48, аналогичная хрома-ографии на бумаге. Системы растворителей для разделения Сахаров на еллюлозе подбираются в предварительных опытах хроматографирова - [ ием на бумаге. Хроматографию на бумаге используют, как правило, и ля определения состава фракций, полученных в результате препаратив-юго разделения. [31]
Тоур [309, 310] описал разделение Сахаров и фенилозазонов на силикате кальция. [32]
Кроме этих опытов, комплектны были также в отдельных случаях применены для количественного определения пятен; Гарднер [20] применил их при анализе Сахаров, а Лакур и Хейн-дрикс [21] для определения кобальта. Гарднер [20] применяет для разделения Сахаров круговую хроматограмму; ее обрабатывают кислотноосновным индикатором с борной кислотой, пятна Сахаров вырезают и вымывают водой. В элюате сахара анализируют по методу Поттерата [22], основанному на восстановлении Си2 и титровании образовавшейся окиси одновалентной меди комплексоном III. Лакур и Хейндрикс [21] по окончании хрома-тографирования не вымывали кобальт из бумаги, но непосредственно на бумаге титровали его комплексометрически. [33]
Разделение и анализ Сахаров методически аналогичны разделению и анализу аминокислот и могут проводиться на идентичном оборудовании. Таким образом, для разделения Сахаров можно применять любой автоматический анализатор аминокислот, если подобрать соот ветствующие смолу, элюент, окрашивающий реагент и температуру колонки. Например, в анализаторе Сахаров фирмы Technicon используется метод боратных комплексов; после разделения элюированные сахара определяются на Автоанализаторе колориметрически по реакции с орсином. Схема анализатора Technicon приведена на рис. 9.9. Термостатируемая ( 45 С) колонка заполняется сильноосновной анио-нообменной смолой ( марки Cromatobeads Technicon типа S) со сферическими гранулами почти одинакового диаметра. Использование однородных гранул позволяет получить максимальное разрешение колонки и свести к минимуму ее сопротивление. Полученный элюент подается на верх ионообменной колонки с помощью микронасоса. Основная масса элюата направляется в коллектор фракций, а небольшая часть подается непосредственно на непрерывный анализ. В анализаторе используются внутренние стандарты. Концентрацию отдельных Сахаров можно рассчитать по площадям пиков диаграммы самописца либо вручную, либо с помощью цифрового интегратора, поставляемого отдельно. [34]
На бумагу наносят 1 ы раствора, содержащего 10 - 50 иа рафинозы или сахарозы и сразу же по каплям добавляют 5 ьл раствора ипвертазы. Спустя 5 мин проводят разделение Сахаров. [35]
Один из них, включающий разделение Сахаров на анионообменных смолах в боратной форме, получил признание в качестве стандартной аналитической методики, усовершенствованию которой посвящено множество сообщений последних лет. Другой вариант ионообменной хроматографии предназначен в основном для фракционирования заряженных олигосахаридов и полисахаридов и предполагает использование в качестве матрицы декстрана или целлюлозы. Ниже рассматриваются области применения обоих ионооб-менников, причем особое внимание уделяется обсуждению последних достижений в данном направлении. [36]
В связи с этим для такого рода разделений непреходящее значение имеет силикагель, а иногда особенно пригодны некоторые химически связанные полярные фазы ( см. разд. Хорошим примером из этой области является разделение Сахаров на колонке с аминофазой. [37]
В лабораторной практике пористые смолы применяют главным образом с неводными или смешанными растворителями, в которых обычные ионообменные смолы очень мало набухают и поэтому равновесие устанавливается слишком медленно. После того как были разработаны методы разделения Сахаров на обычной анионообменной смоле ( гл. Далберг и Самуэль-сон [7] исследовали применение пористых смол для хроматогра-фического разделения других смесей Сахаров. [38]
Разделение Сахаров в большинстве случаев проводят при обычной температуре. Коунсел и сотрудники, исследовавшие влияние температуры на разделение Сахаров и качество хроматограммы, установили, что разделение Сахаров при повышенной температуре ( 37 и 57) приводит к увеличению величины RJ, однако отношение величин fif двух Сахаров при этом снижается, что приводит к ухудшению разделения. [39]
В-Метилдиоксабороланы использованы при исследовании кор-тикостероидов [42], но лучше применять В-фенилдиоксабороланы, поскольку они являются кристаллическими веществами. Гелеобразные полимеры, приготовленные с применением дигидроксифенилборана, использованы для разделения Сахаров, олигосахаридов [45] и нуклеотидов [46]; разделение этих веществ основано на различном комплексообразовании. [40]
Метилджжсабороланы использованы при исследовании кор-тикостероидов [42], но лучше применять й-фенилдиоксабороланы, поскольку они являются кристаллическими веществами. Гелеобразные полимеры, приготовленные с применением дигид роксифенилборана, использованы для разделения Сахаров, олигосахаридов [45] и нуклеотидов [46]; разделение этих веществ основано на различном комплексообразовании. [41]
Тонкоразмолотая смола ( вырабатывается изхмолы № 50), предназначена для разделения Сахаров методом распределительной хроматографии - см. Jonson P. [42]
В этих условиях сорбоза элюируется вместе с ксилозой, ликсоза вместе с рибозой, рафиноза вместе с целлобиозой и трегалоза с сахарозой. Повышение или понижение скорости подвижной фазы на 50 % мало влияло на разделение Сахаров. Этот метод можно использовать как для аналитических ( колонка с внутренним диаметром 0 3 см), так и для препаративных целей ( колонка с внутренним диаметром 2 4 см), причем количество индивидуальных компонентов может изменяться от менее одного микрограмма до нескольких сотых миллиграмма. [43]
Разделение Сахаров в большинстве случаев проводят при обычной температуре. Коунсел и сотрудники, исследовавшие влияние температуры на разделение Сахаров и качество хроматограммы, установили, что разделение Сахаров при повышенной температуре ( 37 и 57) приводит к увеличению величины RJ, однако отношение величин fif двух Сахаров при этом снижается, что приводит к ухудшению разделения. [44]
На бумагу наносят 1 - 150 р; аминосахаров, затем опрыскивают 2 % - иым раствором шшгидрипа в этаноле, содержащем 4 % пиридина. После опрыскивания бумагу помещают в камеру, на дне которой находится 50 % - ный водный раствор пиридина, и нагревают 3 час до 80, после чего проводят разделение Сахаров обычным путем. [45]