Cтраница 1
Размытие хвоста пика наиболее значительно при хроматографическом разделении полярных веществ на неполярных растворителях. Поэтому хро-матографическое разделение воды и низших спиртов на таких жидкостях, как диалкилфталаты, сильно затруднено асимметрией пиков. [1]
Размытие хвоста пика обычно вызывается адсорбцией растворенного вещества твердым носителем, на который нанесена неподвижная фаза. Таким образом, при хроматографическом анализе этанола на набивке, состоящей из целита и силикона, асимметрия пика должна вызываться не взаимодействием между этанолом и силиконом, а адсорбцией этанола на целите. Основная масса растворенного вещества непрочно связывается с распределяющей жидкостью, но небольшие количества его крепко удерживаются целитом и элюируются медленно. Из-за этого и происходит размытие хвоста пика. Найт [68] обнаружил, что размытие хвоста пика можно уменьшить, избегая тех концентраций, при которых адсорбционная изотерма сильно искривляется. Практически этого легче всего достигнуть, поддерживая все время низкую концентрацию вещества на колонке. [2]
Предварительная обработка носителя раствором NaOH в метаноле уменьшает, но не исключает полностью размытие хвоста пика. [3]
С летучими кислотами, как таковыми, трудно работать без потерь; при хроматографическом разделении может произойти размытие хвоста пика; в использованных экспериментальных условиях 2-метилмасляная кислота плохо отделяется от изовалерьяновой кислоты. [4]
Тем не менее амины в достаточной степени полярны и образуют связи с твердыми носителями, что приводит к размытию хвоста пика. Раньше это обстоятельство весьма сильно мешало проведению анализа аминов методом ГЖХ. Однако в настоящее время созданы твердые носители, дающие симметричные достаточно хорошо разделенные пики первичных аминов с числом углеродных атомов до 18 ( см. гл. Амины можно разделять на неполярных и полярных неподвижных жидкостях, и их относительные удерживаемые объемы на полярных жидкостях определяются их способностью образовывать водородные связи с неподвижными жидкостями, а также упругостями их паров. Методом ГАХ можно разделить весьма близкие амины, например м - и п-толуидины. [5]
Низкие отношения дают более высокую эффективность колонки и малые удерживаемые объемы и требуют малых проб, но они могут вызвать размытие хвоста пика из-за адсорбции растворенных веществ на твердом носителе. Набивки, имеющие очень низкие отношения жидкость - твердое вещество ( ниже 1 %), удобны для разделения высококипящих соединений при относительно низких температурах. [6]
Аммиак и метиламины можно отделить друг от друга по их температурам кипения на неподвижной фазе из ундеканола с 15 % парафинового масла. Вследствие адсорбции на твердом носителе происходит размытие хвоста пика. Свободные основания получают из гидрохлоридов аминов in situ в реакционном сосуде, помещенном перед колонкой. Однако при использовании универсального детектора требуется более тщательная очистка вещества, вводимого в хроматограф, от нейтральных соединений. Минимальное количество, обнаруживаемое титрационной ячейкой, составляет около 0 3 мкг ЭКв амина. [7]
Джемс и др. [ 631 наблюдали, что твердый носитель, использованный ими ( целит 545), не является инертным и поглощает амины, приводя к размытию хвоста каждого пика. Предварительная обработка носителя раствором едкого натра в метаноле уменьшает, но не исключает полностью размытие хвоста пика. Это размытие обычно происходит при хроматографическом разделении таких полярных соединений, как спирты и амины, когда носитель полностью не дезактивирован. Интересно бы выяснить, не удастся -, ли уменьшить размытие хвостов пиков, наблюдающееся при разделении метиламинов, применяя специальным образом дезактивированные носители, использованные при разделении жирных аминов, или неорганические соли, использованные при разделении производных пиридина ( см. гл. Джемс и др. [63] утверждают, что наименьшее количество амина, еще обнаруживаемое с помощью титрационной ячейки, равно 0 3 мкг-экв. Это составляет 2 мкг для аммиака, 4 мкг для метиламина, 7 мкг для диметиламина и 8 мкг для триметиламина. [8]
Свободные кислоты стремятся димеризоваться на колонке и, если не принять специальных мер, вызывают размытие хвоста пика. Поэтому Джеймс и Мартин [61] добавляют к силиконовому маслу 550, используемому в качестве неподвижной фазы для их разделения, 10 % стеариновой кислоты. Можно добавлять небольшое количество ортофосфорной кислоты, что дает лучшее разделение муравьиной и уксусной кислот. [9]
При полном покрытии поверхности силикагеля большим количеством кислоты исключается адсорбция компонентов пробы на твердом геле и обусловленное этим размытие хвостов пиков. Смесь хранят в закрытом сосуде, поскольку при наличии в поглощающей смеси 12 % или более воды олефины удаляются неполностью. [10]
Колонки для ГАХ набивают активными твердыми вществами - древесным углем, молекулярными ситами, силикагелем и окисью алюминия. Их используют в основном для анализа неорганических газов и низкомолекулярных углеводородов. Размытие хвоста пика в колонках для ГАХ представляет собой большую проблему, чем в колонках для ГЖХ, но это размытие иногда можно уменьшить, добавляя небольшое количество неподвижной жидкости. Колонки, приготовленные с большими количествами жидкости, могут работать как по адсорбционному, так и по распределительному механизму. [11]
Влажность не предотвращает размытия хвоста пиков аминов. Необходимо тщательно регулировать температуру сатуратора и хроматографической колонки, чтобы избежать дрейфа нулевой линии вследствие колебаний отношения Не / Н2О в газе-носителе. Харва и др. [45] обнаружили, что размытие хвоста пиков насыщенных спиртов на колонках из смеси жидкого парафина с целитом можно уменьшить, добавляя к распределяющей жидкости 0 1 - 0 5 % поверхностно активного вещества. Эффективными оказались спан 20, маноксол ОТ, стеариновая кислота и моностеарат глицерина. [12]
Простейший метод повышения упругости паров аминокислот состоит в переводе их в этиловые эфиры, что впервые осуществил Фишер [17] в своей классической работе по разделению аминокислот фракционной перегонкой. Силиконовая смазка, использовавшаяся в качестве неподвижной фазы, содержала для уменьшения размытия хвоста пика 10 % капрфата натрия. Байер утверждает, что зфиры алифатических кислых, ароматических, серусодержащих и гетероциклических аминокислот быстро и хорошо разделяются. Это безусловно справедливо в некоторых специальных случаях. Однако эфиры многих из этих кислот не появляются на хроматограммах. [13]
Линк и др. [50] для разделения аминов жирного ряда предлагают две набивки. Одна из них представляет собой апьезон L, нанесенный на дезакти - вированный хромосорб W, а другая - силиконовую смазку на дезактивированном хромосорбе. Получают прекрасное разделение аминов жирного ряда с четным числом атомов углерода от 8 до 18 без заметного размытия хвостов пиков. Количественные результаты по анализу известной смеси аминов сравнимы с результатами, опубликованными Нельсоном и Милуном. Авторы сообщают также, что спирты жирного ряда при хроматографиче-ском анализе на этих набивках дают симметричные пики, но не приводят подробных данных. [14]
Вода удерживается почти целый час. Такие колонки используют для анализа спиртов в присутствии воды, поскольку спирты элюируются первыми. Поэтому размытие хвоста пика воды не оказывает никакого влияния на анализ. Эти неподвижные жидкости, однако, не столь эффективны при разделении близких по свойствам спиртов, как неполярные набивки. [15]