Cтраница 2
При приготовлении этих слоев сефадекс не следует пересушивать во избежание неравномерного разделения. Слои сушат лишь до тех пор, пока зерна геля еще остаются видимыми. [16]
Разделение веществ по молекулярному весу было впервые обнаружено при фильтровании через слои набухших зерен крахмала и агар-агара белков. Оказалось, что низкомолекулярные соединения достаточно глубоко диффундируют в объем зерен геля и по этой причине труднее вымываются носителем. Высокомолекулярные соединения, чья диффундирующая способность ниже, остаются в токе носителя и быстрее выходят из колонки. [17]
Для мягких гелей растворитель должен способствовать их набуханию. В идеальном случае растворитель, заполняющий поры геля и пространство между зернами геля, должен одинаково взаимодействовать с молекулами хроматографируемых веществ. Тогда перемещение растворенных веществ в поры происходит только за счет диффузии. [18]
Смешивают в равных объемах жидкое стекло ( пл. При промывании следует избегать энергичного перемешивания смеси, так как желательно, чтобы зерна геля имели размер 4 - 6 мм. [19]
Смешивают в равных объемах жидкое стекло ( пл. При промывании следует избегать энергичного перемешивания смеси, так как желательно, чтобы зерна геля имели размер 4 - 6 мм. [20]
В отличие от распределительной в гель-хроматографии подвижной и неподвижной фазами служит одна и та же жидкость - растворитель. При этом та часть жидкости, которая протекает вдоль слоя твердого носителя - зерен геля, выполняет функцию подвижной фазы и переносит компоненты разделяемой смеси вдоль колонки. Другая часть той же жидкости проникает в шоры зерен геля и выполняет функцию неподвижной фазы. [21]
Разделение смеси веществ происходит вследствие того, что размеры молекул этих веществ различны и зерна геля с порами определенного диаметра пропускают только молекулы, диаметр которых меньше. При пропускании анализируемой смеси более мелкие молекулы проникают в поры и поэтому движутся вдоль зерен геля медленнее, чем крупные молекулы, не проникающие в поры. [22]
Метод гельфильтрации основан на способности набухшего геля захватывать небольшие растворенные молекулы и не задерживать молекулы, превышающие определенную величину. Те молекулы, размеры которых превышают величину отверстий пространственной сетчатой структуры, быстрее проходят между зернами геля, чем молекулы меньших размеров, проникающие через отверстия попереч-носшитой структуры внутрь геля, и, таким образом, вынуждены проходить по значительно более длинному - пути. В таких условиях из геля позже всего вымываются молекулы наименьших размеров. [23]
Таким образом, наиболее важными факторами, влияющими на величину ВЭТТ, а следовательно, и на эффективность колонки, являются скорость достижения диффузионного равновесия и диффузия в продольном направлении. Влияние этих факторов выражается в том, что ширина кривой элюирования со определяется главным образом величиной зерен геля. Следует упомянуть и третий фактор: ВЭТТ аномально возрастает, если колонка заполнена неравномерно или же допущены другие технические ошибки. Наличие холостого объема в колонке, в ячейке детектора и в соединительных шлангах также способствует увеличению ВЭТТ. [24]
Гелевая хроматография, как любой реальный хроматографический процесс, является неравновесной и неидеальной. Неравновесность объясняется запаздыванием в движении точек с равновесной концентрацией в неподвижной фазе по отношению к подвижной, а неидеальность - размыванием зоны вещества в подвижной фазе в результате молекулярной диффузии и так называемого грануляционного эффекта, обусловленного различиями в скоростях движения жидкости в капиллярах между зернами геля. Совокупность указанных процессов называется продольной диффузией. [25]
Установлено, что гели сефадексов марок G-25, G-50, G-75, G-100 и G-200 не сорбируют амилолитические ферменты. Можно предположить, что амилолитические ферменты, имеющие молекулярный вес в пределах 60000 - 70000, не сорбировались даже сефадексами G-100 и G-200 в связи с тем, что находились в сорбционном равновесии с неактивными белками, имеющими значительно больший молекулярный вес, чем амилаза, и тем самым не задерживались внутри зерен геля сефадекса. [26]
Смешивают равные объемы растворов силиката натрия Na2SiO3, пл. Через сутки гель разрезают на куски и промывают декантацией водой до удаления ионов СГ. Желательно иметь зерна геля размером 4 - 6 мм, поэтому следует избегать сильного перемешивания при промывании. [27]
Гели были впервые применены для разделения жидких смесей Поратом и Флодином в 1959 г. В гель-хроматографии подвижной и неподвижной фазами служит одна и та же жидкость, т.е. растворитель. Часть жидкости, протекающая вдоль зерен геля ( твердого носителя), выполняет роль подвижной фазы и переносит компоненты смеси вдоль колонки. Но другая часть жидкости проникает в поры зерен геля и играет роль неподвижной фазы. [28]
В отличие от распределительной в гель-хроматографии подвижной и неподвижной фазами служит одна и та же жидкость - растворитель. При этом та часть жидкости, которая протекает вдоль слоя твердого носителя - зерен геля, выполняет функцию подвижной фазы и переносит компоненты разделяемой смеси вдоль колонки. Другая часть той же жидкости проникает в шоры зерен геля и выполняет функцию неподвижной фазы. [29]
Необходимо различать два диффузионных [6, 79-81] процесса. При концентрации менее 0 003 М скорость обмена определяется диффузией ионов через пленку раствора, окружающую каждое зерно смолы. Во втором случае при концентрации ионов выше 0 1 М скорость обмена определяется диффузией ионов через зерна геля. [30]