Аминокислотный анализатор
Cтраница 1
Аминокислотный анализатор содержит колонку с ионообменной смолой, через которую аминокислоты проходят с разными скоростями. Элюат автоматически смешивается с раствором нингидрина, который окрашивается, если элюируется аминокислота. Окраска контролируется спектрофотометром и автоматически рисуется график зависимости поглощения от времени. [1]
Первые аминокислотные анализаторы были изготовлены фирмой Beckman ( Fullerton, Calif. USA) в 1958 г. Прибор ( модель 120 А) состоял из двух блоков, в которых размещалось оборудование для хроматографии и детектирования. [2]
В обычном аминокислотном анализаторе NC-2 сохранен блочный принцип. Прибор имеет два колориметра, с полосами пропускания при 570 и 440 нм; в случае необходимости можно использовать один колориметр с полосой при 410 нм. Полагают, что потерю чувствительности можно многократно перекрыть благодаря непрерывному 10-кратному расширению шкалы, что вообще является конструктивной особенностью этих колориметров. Для достижения максимального разрешения используют также рассечение потока пузырьками азота ( что является характерной особенностью анализатора Tecni-соп), хотя новый состав нингидринового реагента, с использованием гидразинсульфата, делает излишним хранение его под азотом. Предел детектирования аминокислот составляет 1 нмоль. [3]
При создании аминокислотных анализаторов были использованы все достижения аминокислотного анализа. Хроматография аминокислот на ионитах по существу осталась без изменений; необходимо было только обеспечить подачу элюента с постоянной скоростью. Потребовалось также преобразовать нингидриновый метод детектирования в непрерывный процесс, что было достигнуто путем модификации двух хорошо известных методов. Несколько позднее для проведения анализа был использован автомат для серийных колориметрических анализов, созданный фирмой Technicon. [4]
На основе классического аминокислотного анализатора создана модель 120С, ставшая стандартным аналитическим прибором. Образец вносят вручную, некоторого внимания требует регенерация и уравновешивание колонки. Однако эта модель более универсальна и позволяет осуществлять препаративное разделение на колонках большего диаметра. [5]
В некоторых аминокислотных анализаторах ( например, Phoenix VG-6000, VG - 6IOO, K-8000 - VG, Technicon Auto Analyzer) для разделения аминокислот используют метод градиентной элюции ( см. Piez К. [6]
Проточный регистрирующий фотометр аминокислотного анализатора должен удовлетворять двум основным требованиям: он должен сохранять стабильной базовую линию в течение длительного времени, а форма проточной кюветы должна обеспечивать быструю и полную смену раствора. Стабильность базовой линии достигается благодаря использованию эффективного стабилизатора источника питания. Что касается кюветы, то она должна иметь по возможности минимальный объем. Обычно кювету готовят из тонкой трубки с плавными переходами от широкого диаметра к узкому. [7]
Благодаря широкому применению автоматических аминокислотных анализаторов определение аминокислотного состава пептидов не представляет в настоящее время значительных трудностей. Однако один из важнейших вопросов установления первичной структуры белков и пептидов - определение последовательности аминокислотных остатков в цепи продолжает оставаться весьма трудоемким и сложным. Недавно было установлено, что при масс-спектрометрировании эфиров N-ацилированных олигопептидов в качестве первого акта фрагментации молекулярного иона происходит элиминация алк-оксильной группы и возникает линейный ион, у которого положительный заряд локализован на С-конце, а N-конец защищен ацильным остатком. Дальнейший распад этого иона заключается в последовательной элиминации аминокислотных остатков с перемещением положительного заряда вдоль цепи. [8]
Анализ смеси аминокислот автоматическим аминокислотным анализатором Штейна и Мура отнимает всего несколько часов. Но такой анализ ничего не говорит о последовательности связи аминокислотных остатков. [9]
Для проведения количественных определений аминокислотный анализатор должен быть откалиброван. Площади пиков обычно соотносят с пиком Lys, который менее других аминокислот разрушается при гидролизе. [10]
 |
Схема устройства для фор. [11] |
Аналогичное устройство введено и в аминокислотный анализатор 21 ], который работает при средних давлениях. В хроматографе фирмы Du Pont, модель 830, с однонасосным градиентным устройством применяется соединение, показанное на рис. 8.14. Форма градиента зависит от работы двух соленоидных клапанов V и V2, которые открываются поочередно на запрограммированные промежутки времени. [12]
В настоящее время можно приобрести автоматические аминокислотные анализаторы нескольких типов, каждый из которых имеет свои преимущества и недостатки. Это определяется скорее не ценой, а надежностью как в обеспечении непрерывности операции, так и в способе программирования работы прибора. По-видимому, прибор с приспособлением для автоматического нанесения образца, надежно обеспечивающий непрерывность в работе, можно считать вполне экономичным. [13]
Спакманом и др. [38] сконструированы оригинальные аминокислотные анализаторы, которые в настоящее время используются для автомэтического анализа соединений типа Сахаров и нуклеиновых кислот ( нуклеотидов, нуклеозидов), пурина и пиримидиновых оснований. [14]
Таким образом, на базе аминокислотного анализатора был создан прибор, удовлетворяющий современным требованиям - автоматический аминокислотный анализатор. [15]
Страницы: 1 2 3 4