Аминокислотный анализатор

Cтраница 4

При уравновешивании обычно применяют цитратный буферный раствор, имеющий концентрацию Na 0 02 М и рН 3, используемый в 10-кратном - разведении в качестве первого буферного раствора ( А) в аминокислотном анализаторе. Во время уравновешивания пластинки нижняя часть слоя ( погружаемая в буферный раствор) может расслоиться, сползти с подложки или полностью отделиться от нее. Поэтому при уравновешивании следует погружать конец пластинки не более чем на 1 см, а после высушивания целесообразно снимать с пластинки эту полоску слоя ионообменника. [46]

Гидразиды аминокислот удаляют реакцией с бензальдегидом, изо-валериановым и другими альдегидами, а находящуюся в водной фазе С-концевую аминокислоту анализируют методами хроматографии или электрофореза на бумаге и в тонком слое или с помощью аминокислотного анализатора. [47]

Важность этой реакции определяется не только тем, что она представляет собой качественную пробу, но и тем, что при этом образуется поглощающее свет вещество, которое можно определить количественно с помощью автоматического аминокислотного анализатора. Эту цветную реакцию используют также для установления присутствия и положения аминокислот после разделения их с помощью хроматографии на бумаге ( гл. [48]

С-Концевая аминокислотная последовательность определяется следующим образом: субстрат инкубируется с ферментом при 25 - 37 Си через определенные интервалы времени из реакционной смеси отбираются ал и квотные части, реакция останавливается подкислением и количество отщепленных аминокислот определяется на аминокислотном анализаторе. [49]

Для калибровки аминокислотных анализаторов используют все аминокислоты, входящие в состав белков или встречающиеся в физиологических жидкостях или биологических экстрактах. Соответственно различают два стандарта: белковый гидролизат и смесь редких аминокислот. [50]

В последнюю группу попадает и триптофан за счет своей высокой гидрофобности. Для других марок катионообменников, на других аминокислотных анализаторах можно получить несколько иные расстояния между пиками, но общий порядок их выхода сохраняется, за исключением, пожалуй, только гистидина, который с некоторых обменников элюи-руется позже триптофана и даже лизина. [51]

Аминокислотный состав устанавливается путем анализа пептидных и белковых гидролизатов в основном хроматографиче-скими методами. В настоящее время такой анализ осуществляется с помощью аминокислотных анализаторов. [52]

Далее проводят их хроматографическое разделение, причем для выявления зон, содержащих аминокислоты, хроматограмму прокрашивают нингидрином. Эти операции могут проводиться на специальных приборах - аминокислотных анализаторах. В этом случае полученный гидролизат наносят на хроматографическую колонку и затем элюируют по стандартной программе, обеспечивающей разделение всех аминокислот, входящих в состав белков. Перед регистрацией выходящего элюата к нему примешивают нингидрин и смесь пропускают через специальный термостат, время прохождения через который и температура подобраны таким образом, чтобы процесс (VII.1) полностью завершился. После выхода из термостата окрашенные зоны проходят через кювету фотометра, в котором проводится количественное измерение содержания красителя, а тем самым и содержания аминокислоты. Так как каждая аминокислота в этой системе имеет определенное время выхода из колонки, то идентификация аминокислот, соответствующих окрашенным зонам, не вызывает затруднений. [53]

Хроматограмма, полученная при автоматическом разделении ароматических аминокислот ( поясняет работу интегратора. [54]

В более современных приборах методика обработки данных существенно улучшена. Приведенные ниже данные получены главным образом на аналитической системе аминокислотного анализатора D-500 фирмы Durrum. Для количественного анализа достаточно 50 мкг белкового пиролизата. Объем проточной ячейки равен 1 9 м-кл, а длина оптического пути составляет 5 мм. [55]

Страницы: 1 2 3 4