Раствор - альбумин
Cтраница 4
Сущность способа заключается в осаждении загрязнении кровяным альбумином. Очистку нужно проводить следующим образом. Отработанную вальцмассу разрезать на куски, поместить в железный бак или чан с водяной рубашкой, залить 1 5 части воды, нагреть содержимое бака или чана до 50 С ( но TIC выше) и перемешать до полного растворения кусков вальцмассы; в отдельной посуде приготовить 10 - 15 % - ный раствор белого кровяного альбумина ( из расчета 3 г сухого альбумина на 1 л раствора вальцмассы) и приливать этот раствор альбумина при помешивании к раствору вальцмассы, медленно нагревая смесь до 80 - 90 С. [46]
Сущность способа заключается в осаждении загрязнении кровяным альбумином. Очистку нужно проводить следующим образом. Отработанную вальцмассу разрезать на куски, поместить в железный бак или чан с водяной рубашкой, залить 1 5 части воды, нагреть содержимое бака или чана до 50 С ( но TIC выше) и перемешать до полного растворения кусков вальцмассы; в отдельной посуде приготовить 10 - 15 % - ный раствор белого кровяного альбумина ( из расчета 3 г сухого альбумина на 1 л раствора вальцмассы) и приливать этот раствор альбумина при помешивании к раствору вальцмассы, медленно нагревая смесь до 80 - 90 С. [47]
 |
Диализатор. / - целлофановый мешочек. 2 - стеклянная трубка с краном. 3 - крышка сосуда. [48] |
Так как к концу диализа раствор в мешочке не содержит солей, солерастворимые белки выпадают в осадок, а в растворе остаются только альбумины. Для отделения альбуминов от солерастворимых белков содержимое мешочка вместе с осадком переносят в центрифужные пробирки, мешочек споласкивают 2 - 3 раза водой, которую также выливают в те же пробирки, и растворимые белки отделяют от нерастворимых центрифугированием в течение 5 - 10 минут при 3 - 4 тыс. об / мин. Жидкость над осадком сливают в мерную колбу объемом 0 5 или 1 л, а осадок в центрифужных пробирках 2 - 3 раза промывают водок с последующим центрифугированием. Промывные воды сливают в мерную колбу. Раствор альбуминов в колбе доводят водой до метки и ставят в холодильник. [49]
После пропускания через колонку фракции, содержащие белок, объединяют и доводят до определенного объема 0 05 М раствором ацетата натрия. Вторую часть раствора альбумина, которая служит в качестве контрольной, доводят до того: же объема. Совпадение значений оптической плотности обоих растворов при 280 нм показывает, что неспецифическая сорбция на геле не имеет места. В случае сферона, если сравниваемые растворы не обнаруживают одинакового поглощения, гель следует промыть органическими растворителями, разбавленной кислотой, а затем тщательно дистиллированной водой. [50]
Белок, взятый из одного или двух яиц, растворяют в 100 мл дистиллированной воды. На воронку Бюхнера ( воронка для отсасывания) кладут бумажный фильтр, смачивают его дистиллированной водой, включают водоструйный насос и отсасывают раствор белка. К 40 - 50 мл полученного раствора прибавляют небольшими порциями порошок сульфата аммония и взбалтывают для ускорения растворения. При насыщении из раствора выделяется альбумин в виде хлопьев или сгустков. Отфильтрованный осадок альбумина высушивают фильтровальной бумагой и переносят в чистую воду; при этом альбумин вновь растворяется. Часть раствора альбумина яичного белка, оставшуюся от предыдущей работы, нагревают до кипения, медленно повышая температуру; при температуре приблизительно 50 - 60 С в растворе появляется белая муть, и при дальнейшем нагревании образуются хлопья. Осадок и находящийся над ним раствор оставляют охлаждаться; полученный осадок в воде не растворяется, так как в результате нагревания произошли необратимые изменения в белке, называемые денатурацией. [51]
Холл [2] рекомендует применять для этой цели целлюлозную ленту, но можно воспользоваться, например, обычным липким пластырем. После образования сухой коллодиевой пленки ее надрезают у толстого конца и увлажняют дыханием; конденсирующаяся влага, по-видимому, проникает в пленку и облегчает ее отделение. Если между лентой и пленкой остаются пузырьки воздуха, их тщательно удаляют, надавливая сверху иглой. Прилагая небольшое усилие и сохраняя острый угол между лентой и поверхностью ( рис. 30, б), осторожно отделяют ленту с пленкой от объекта. По отражению света легко убедиться в том, что пленка имеется над сетками. При помощи лезвия бритвы или скальпеля пленку надрезают вокруг сеток и пинцетом снимают с ленты. Если пленка не плотно лежит на сетке, то со стороны сетки наносят небольшую каплю 0 1 % - ного раствора альбумина и отсасывают избыток раствора. После высыхания раствора пленка оказывается прочно приклеенной к сетке, причем качество изображения не портится, так как молекулы белка концентрируются в местах контакта пленки и сетки. [52]
Страницы: 1 2 3 4