Cтраница 4
Для этого две порции кислоты по 10 мл титруют той же краской до ясно-розового окрашивания. Полученную поправку ( обычно не превышающую 0 08 - 0 10 мл раствора краски) вычитают из данных титрования опытных растворов. [46]
Одновременно берут определенные объемы стандартного раствора из такого расчета, чтобы в 5 мл содержалось 0 5, 1 и 2 г гликозида, и приливают к ним по 5 мл пикрата натрия. По истечении 18 - 20 минут ( при 18) приступают к колориметрированию. Опытные растворы сравнивают со стандартными в близких концентрациях. [47]
Окраска образующегося комплекса развивается практически сразу и сохраняется около часа. Одновременно с опытными растворами готовят контрольный раствор сравнения, содержащий те же компоненты и дистиллированную воду вместо фильтрата. [48]
Содержимое пробирок перемешивают и фильтруют. В полученных фильтратах определяют поляризацию на визуальном или автоматическом поляриметре в трубке длиной 2 дм. Получают два значения поляризации: Як - контрольного раствора н Я0 - опытного раствор. Разность между значениями вращения плоскости поляризации контрольного и опытного растворов ( Як - Я0) показывает величину снц-жения поляризации ДЯ. [49]
Содержимое пробирок перемешивают и фильтруют. В полученных фильтратах определяют поляризацию на визуальном или автоматическом поляриметре в трубке длиной 2 дм. Получают два значения поляризации: Як - контрольного раствора н Я0 - опытного раствор. Разность между значениями вращения плоскости поляризации контрольного и опытного растворов ( Я - Я0) показывает величину снц-жения поляризации ДЯ. [50]
Содержимое пробирок перемешивают и фильтруют. В полученных фильтратах определяют поляризацию на визуальном или автоматическом поляриметре в трубке длиной 2 дм. Получают два значения поляризации: Як - контрольного раствора н Я0 - опытного раствор. Разность между значениями вращения плоскости поляризации контрольного и опытного растворов ( Як - Я0) показывает величину снц-жения поляризации ДЯ. [51]
В качестве биотеста можно использовать одинаковые проростки гороха, фасоли, которые отбирают из партии после их прорастания. У горошин срезают половинки обеих семядолей, чтобы у них было ровное ложе. Фильтровальную бумагу, лежащую на дне химического стакана емкостью 200 - 250 мл смачивают 5 мл опытного раствора, на дно помещают по 5 подготовленных горошин, закрывают крышкой от чашки Петри. После того, как горошины вырастут на высоту 5 - 7 см и более ( до крышки стакана), производят их измерение. [52]
Для этого 5 см3 раствора исследуемого ферментного препарата помещают в пробирку и нагревают 10 мин в кипящей водяной бане для инактивации фермента. Затем к раствору добавляют 10 см3 субстрата и проводят все последующие операции так же, как и при работе с опытным раствором. Кроме того, ставят контрольную пробу на реактив С. Для этого к 3 см3 реактива С приливают 1 см3 дистиллированной воды и выдерживают 45 мин. [53]
Чтобы избежать воздействия микроорганизмов, Баллин ( Ballin, 1967) предложил сократить срок выращивания отрезков до 6 - 8 час. Он отмечает, что кроме опасности микробного заражения длительная экспозиция смазывает различия между вариантами. Рост контрольных отрезков колеоптилей в течение 20 час. ИУК в первые 8 час. Исходя из этого при долгой инкубации уменьшается разница между контрольными и опытными растворами. [54]
Из листа растения вырезают сверлом 8 дисков. Для этого лист нижней стороной поворачивают вверх, под-кладывают под него резиновую пластинку и между крупными жилками выбивают диски. Опускают по 2 диска в каждую пробирку нижнего ряда на 40 минут. Через каждые 10 минут встряхивают пробирки с дисками. Затем стеклянной палочкой выводят диски на стенки пробирок. Подкрашивают опытные растворы в пробирках нижнего ряда метиленовой синей, взятой в небольшом количестве на кончике проволочки. Встряхивают пробирки, добиваясь равномерной окраски раствора. [55]
Нанесенное на бумагу вещество движется с током растворителя. После прохождения фронтом растворителя определенного расстояния бумагу высушивают и обрабатывают тем или иным проявителем. Параллельно с опытным раствором на тот же лист бумаги наносят стандартный раствор исследуемого вещества ( свидетель), который будет указывать местоположение определяемого вещества. Для идентификации вещества можно также пользоваться величиной JRf, которая является отношением расстояния, пройденного данным веществом, к расстоянию, пройденному фронтом растворителя. Величина Rf зависит от растворителя и качества бумаги. Различают восходящую ( растворитель поднимается по бумаге вверх) и нисходящую ( растворитель движется по бумаге вниз) хроматографию. [56]
Для анализа берут две пробирки, наливают в каждую по 10 мл субстрата и ставят в ультратермостат с температурой 30 0 2 С. В термостате пробирки с субстратом выдерживают 5 - 10 мин. В растворах под действием соляной кислоты происходит инактивация ферментов. Продукты реакции вступают в реакцию с йодом и растворы окрашиваются: контрольный в синий цвет, испытуемый - в фиолетово-коричневый различной интенсивности в зависимости от количества прогидролизо-ванного крахмала. Оптическую - плотность окрашенных растворов определяют на ФЭК в кюветах с рабочей длиной 10 мм и светофильтром, имеющим максимум светопропускания при Х656 нм. Получают два значения оптической плотности: DI - оптическая плотность контрольного раствора, характеризующая количество крахмала, взятого на ферментативную реакцию ( 0 1 г) и D2 - оптическая плотность опытного раствора, характеризующая количество крахмала, оставшегося непрогидролизованньш после действия фермента. Этот крахмал надо понимать условно, так как фактически в растворе крахмала нет, он превратился в декстрины различной молекулярной массы, которвге и дают фиолетово-коричневую окраску. [57]