Биуретовый реактив

Cтраница 1

Биуретовый реактив для микроопределения ( реактив Бенедикта): 17 3 г цитрата натрия и 10 г Na2CO3 растворяют при подогревании в небольшом количестве воды. В раствор добавляют 1 73 г сульфата меди, растворенного в 10 мл воды, и доводят водой до 100 мл. [1]

Приготовление биуретового реактива: 0 75 г меди сульфата и 3 г натрия-калия тартрата растворяют в 250 мл воды в мерной колбе вместимостью 1 л, затем при энергичном перемешивании прибавляют 150 мл 10 % раствора натра едкого, свободного от углекислоты, 1 г калия йодида, перемешивают и доводят объем раствора водой до метки. [2]

В каждую пробирку наливают по 4 мл биуретового реактива. Содержимое пробирок хорошо перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 20 мин для развития окраски. В качестве контрольного раствора при измерении на ФЭКе используют биуретовый реактив. [3]

Затем к 3 мл каждого разведения приливают по 3 мл биуретового реактива и определяют поглощение в фотоколориметре. Для каждого разведения делают не меньше 3 определений. На миллиметровой бумаге наносят по оси ординат деления колориметра, по оси абсцисс - процентное содержание белка и находят точку пересечения этих значений для каждого из разведений белка. Полученная кривая ( фактически - прямая линия) пригодна для определения всех фракций. [4]

После полного растворения белка ( до исчезновения мути) добавляют 4 мл стандартного биуретового реактива ( с. Колориметрируют при 540 нм в кюветах толщиной 10 мм. [5]

Определение белка в препарате цитохромоксидазьь Содержание белка в полученном препарате измеряют с биуретовым реактивом ( с. Ионетани [3], которая состоит в том, что к раствору цитохромоксидазы перед добавлением биуретового реактива добавляют 0 05 мл 30 % - него раствора перекиси водорода. Такая обработка фермента позволяет уменьшить вклад поглощения фермента в оптическую плотность комплекса белка с биуретовым реактивом. [6]

К 1 мл раствора, содержащего от 2 до 10 мг белка, добавляют 4 мл биуретового реактива. Пробы перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 30 мин, после чего колориметрируют на ФЭКе при 540 нм. [7]

Общий бе л о к: 0 2 мл сыворотки смешивают с 4 8 мл воды и прибавляют 5 мл биуретового реактива. [8]

Калибровочная кривая для определения массовой доли белка биурвговым методам. [9]

Отмеривают цилиндром с ценой деления 0 1 см3 под тягой 2 см3 четыремлори-стого углерода для извлечения жира из образца, добавляют пипеткой 100 см3 биуретового реактива. [10]

Для солюбилизации мембранных белков часто используют неионные детергенты, такие как тритон Х-100, твин-80 и др. Эти детергенты влияют на развитие окраски при определении белка с биуретовым реактивом и методом Лоури. [11]

Реактивы: NaCl, 0 9 % - ный раствор; глициновый буфер ( рН 9 5); аргинин, 0 007 моль / л раствор ( рН 9 5); трихлоруксусная кислота ( ТХУ), 5 % - ный раствор; цветной реактив; мочевина, стандартный раствор ( 0 02 мг / мл); биуретовый реактив. [12]

Супернатант отбрасывают, а осадок тщательно суспендируют в небольшом объеме 0 9 % - ном К. Измеряют содержание белка с биуретовым реактивом и суспензию разводят до конечной концентрации белка 10 мг / мл. [13]

В 12 пробирок отмеривают по 1 мл биуретового реактива. К колонке присоединяют де лительную воронку с водой и открывают кран. [14]

Прозрачные растворы альбумина отсасывают пипетками и переносят по 3 мл в чистые пронумерованные пробирки. В каждую пробирку добавляют по 3 мл биуретового реактива, перемешивают и оставляют на 30 минут. По истечении этого срока, окраску исследуемого раствора сравнивают в колориметре с окраской раствора стандартной сыворотки, в которой известно содержание альбумина. [15]

Страницы: 1 2