Cтраница 2
Наличие диазогруппы доказано спектроскопически по полосе при 4 66 мк в инфракрасном спектре, соответствующей алифатической диазо-группе; при кислотном гидролизе выделяется азот. Третий атом азота, содержащийся в молекуле, входит в состав МН2 - группы, что следует из ИК-спектра и нингидринной реакции. [16]
А; Ь - путь, пройденный веществом В. На величину Rf могут влиять различные факторы: стадия проявления хроматограммы, сорт бумаги, направление волокон в куске бумаги, реакция, применяемая для проявления, концентрация разделяемых веществ, температура, время проявления и др. Для получения наиболее надежных значений Rf необходим надлежащий выбор цветной реакции для проявления пятен; например, при разделении белков, полипептидов, аминокислот часто употребляют нингидринную реакцию. Бумага, применяемая в качестве носителя ( суппорта) в распределительной хроматографии, должна удовлетворять определенным требованиям. Бумага должна быть чистой и однородной по составу и строению волокон, с длиной волокон от 0 5 до 3 мм. Смесь бутилового спирта с уксусной кислотой в такой бумаге проходит путь в 15 - 25 см за 6 ч при комнатной температуре. Линтерная целлюлоза представляет высокомолекулярный полисахарид, содержащий от 2500 до 3000 остатков глюкозы в макромолекуле. Текстура такой бумаги должна быть всюду одинаковой. [17]
После нейтрализации был выделен 2-амино - 4-окси - 6-метилпи-римидин. Фильтрат дает положительную нингидринную реакцию. [18]
Для того чтобы избежать побочных реакций и повысить реакционную способность оксазолона, были поставлены опыты в растворе ацетона между серином и 2-п-нитрофенил - 4-метил - 5-оксазолоном с эквивалентным количеством щелочи. Однако и в этом случае реакция пошла по другому направлению. Оно не давало нингидринной реакции и реакции на - оксиаминокислоты с бензойным ангидридом. Это же самое соединение получалось при взбалтывании 2 - - нитрофенил-4 - метил-5 - оксазолона в ацетонощелочном растворе. [19]
В книге достаточно детально рассмотрены основные преимущества и недостатки классического метода определения аминокислотного состава белков с помощью ионообменной хроматографии по Муру и Стейну; даны указания относительно выбора ионообменников, подготовки реактивов и численной интерпретации результатов. Значительное место также уделено изложению принципов анализа аминокислот методом газожидкостной хроматографии. Применение этого метода, обладающего на 2 - 3 порядка большей чувствительностью по сравнению с нингидринной реакцией по Муру и Стейну, позволяет значительно снизить количества белка, требуемые для определения его состава. Анализ аминокислот с помощью газожидкостной хроматографии пока еще не находит широкого применения, однако имеющиеся в литературе данные позволяют считать этот метод весьма перспективным. Кроме того, обсуждаются возможности использования газожидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектромет-рией для определения состава и аминокислотной последовательности в пептидах. [20]
К раствору 500 мг глицил - Ь - лейцилгл ицил гл ицил - L-лейцил глицина в 500 мл метилового спирта при 20 прибавляют 1 75 мл этоксиацетилена. Метанольиый раствор выпаривают в вакууме до небольшого объема и разбавляют 15 мл воды. Вещество нерастворимо в 2чь соляной кислоте и в едком натре, а также в большинстве органических растворителей; оно не дает нингидринной реакции. [21]
Помимо рассмотренных реакций Абдергальденом и Швабом [19] был использован также метод приготовления дикетопиперазинов, связанных с аминокислотами, не непосредственным действием друг на друга этих веществ, а циклизацией трипептидов. Полученные трипептиды, синтезированные по Фишеру, переводились в соответствующие метиловые эфиры и оставлялись в аммиачном растворе метилового спирта при комнатной температуре. Во всех случаях через определенные промежутки времени были получены кристаллические вещества, которые давали положительную ангидридную реакцию в содовом растворе с пикриновой кислотой, отрицательную нингидринную реакцию и не содержали свободных аминных групп. [22]
В этой работе Фишер и Лауфер изучали кинетику реакции по убыли вирулентности вируса и по возрастанию электрофоретиче-ской подвижности, параллельно измеряя количество свободных аминогрупп с помощью нингидринной реакции. Полученные результаты они объясняют наличием трех типов свободных аминогрупп, одного - обратимо реагирующего с формальдегидом, и двух других - взаимодействующих с формальдегидом необратимо, но с различными скоростями. [23]
Дженколовая кислота растворима как в кислоте, так и в щелочи. С успехом используется также настой из верхних листьев капокового дерева. Постепенное исчезновение осадка дженколовой кислоты в моче больных при стоянии может быть объяснено появлением щелочной реакции. Дженколовая кислота дает сильную нингидринную реакцию. Эти наблюдения указывают на ее аминокислотное строение. Такое предположение было подтверждено образованием дигидантоина ( V) при взаимодействии с цианатом калия. Было получено также дибензоильное производное. [24]
Считая вначале выделенное вещество тетрапептидом, тирозилглицилаланил-глицином Абдергальден синтезировал аналогичный тетрапептид и сравнил их друг с другом. Изолированное из шелка соединение не давало нин-гидринной реакции [14] при обычном проведении ее, и реакция была положительной только после продолжительного кипячения с нингидрином. Тетрапептид, полученный синтетическим путем, напротив, давал нингидринную реакцию и не давал пикриновой. Если нагреть выделенное вещество со щелочью или оставить стоять в течение нескольких часов при комнатной темпера-ратуре, то пикриновая реакция исчезает. В то же время появляются нин-гидринная реакция и интенсивная биуретовая красного цвета. Последнее свидетельствует о разрыве кольца и образовании более длинной пептидной цепи. На основании этих только качественных свойств Абдергальден пришел к выводу, что выделенное вещество не идентично тетрапептиду и является N, N - диаминоацильным производным дикетопиперазина. Но это соединение, как следует из приписанной ему формулы, должно было бы обладать свободными аминными группами и основным характером. Абдергальден же ограничивается лишь констатацией у этого соединения качественной нин-гидринной реакции. [25]