Сефакрил
Cтраница 1
Сефакрилы используют для очистки плазмид, рибосом и даже целых вирусов, для фракционирования рестриктазных фрагментов ДНК и др. Соответствующие примеры приведены ниже. [1]
Сефакрил устойчив в диапазоне рН отЗдо 11, в нейтральной среде ( рН7) его можно автоклавировать при температуре до 120 С. [2]
Сефакрилы поставляются уже набухшими, в виде густой водной суспензии. [3]
Жесткость сефакрилов, в том числе и наиболее крупнопористых, позволяет использовать их в водных буферах со скоростями элюции порядка 40 мл / см2 - ч и не слишком сильно снижать их при работе с вязкими элюеитами. Так, сефакрил S-400 не сжимается при элюции колонки 6 М раствором гуанидинхлорпда со скоростью 20 мл / см2 - ч, а сефакрил S-1000 позволяет с такой же скоростью вести элюцию чистым формамидом. [4]
 |
Графики селективности сефадек-сов типа Superfine.| Графики селективности сефа-крилов для глобулярных ( а и денатурированных ( б белков.| Графики селективности сефарозы. [5] |
Выпускается пять типов сефакрилов ( от S-200 до S-1000; все - Superfine), различающихся по пористости, но с одинаковым разбросом диаметров сферических гранул: 40 - 105 мкм. [6]
Как видно из представленных данных, сефакрилы пригодны для фракционирования или очистки крупных макромолекул, но не могут заменить сефадексы малых номеров, пригодные для работы с относительно низкомолекулярными объектами. Как будет видно из сопоставления с данными, приведенными ниже, сефакрилы могут успешно конкурировать с гелями агарозы. Пористость сефакрила S-1000 Superfine - примерно такая же, как у 0 5 % - ной агарозы, а сефакрила S-400 Superfine - как у 5 % - ной. [7]
 |
Очистка шлазмид-ной ДНК от РНК гель-фильтрацией на колонке сефакрила S-300. [8] |
Еще более крупнопористую жесткую матрицу - сефакрил S-1000 - недавно было предложено использовать для быстрой препаративной очистки ДНК плазмид от примеси ДНК бактерии-хозяина. Последняя при гель-фильтрации на указанной матрице выходит на переднем фронте высокомолекулярного пика ДНК, и ее можно отбросить. [9]
 |
Калибровочный график для колонки с биогелем А-5 т ( текст [ Fish et al., 1969 ]. [10] |
Белев и соавторы для определения молекулярных масс денатурированных белков методом гель-фильтрации использовали сефакрил S-200 Superfine. [11]
Наиболее широкое распространение среди носителей для гель-хроматографии белков получили сорбенты, приготовленные на основе декстрана ( сефадексы, сефакрилы, молселекты), полиакриламида ( биогели Р, акрилексы) и агарозы ( сефарозы, биогели А) и др. Набухая в воде, они образуют гели. [12]
Жесткость сефакрилов, в том числе и наиболее крупнопористых, позволяет использовать их в водных буферах со скоростями элюции порядка 40 мл / см2 - ч и не слишком сильно снижать их при работе с вязкими элюеитами. Так, сефакрил S-400 не сжимается при элюции колонки 6 М раствором гуанидинхлорпда со скоростью 20 мл / см2 - ч, а сефакрил S-1000 позволяет с такой же скоростью вести элюцию чистым формамидом. [13]
Получается очень жесткий гель, пористость которого легко контролировать. Благодаря своей жесткости сефакрил может быть использован при значительно больших скоростях элюции, чем сефадекс с такой же пористостью. Сефакрил поставляется в виде суспензии набухших гранул с размерами 40 - 105 мкм. Подробные данные об этих матрицах изложены в гл. [14]
Декстрановый гель, сшитый посредством реакции с N, N - метилен-бис-акриламидом ( мостики: - CH2CH2CONHCH2NHCOCH2CHa -, ср. По сравнению с сефадексом сефакрил обладает улучшенной механической прочностью, являясь полужестким гелем, благодаря чему возможно его использование в ВСЖХ. Гель применим не только в водных, но и в органических средах, в которые его переводят через серию смесей растворителей промежуточного состава. [15]
Страницы: 1 2