Скорость - подача - элюент
Cтраница 2
Так как сорбция в этом случае проходит по всему объему набухших частиц крахмала, скорость подачи элюента должна быть достаточно низкой, чтобы между сорбентом и подвижной фазой / сп ев ал о устанавливаться равновесие. [16]
Площадь пика делят вертикальными линиями на участки, соответствующие смещению ленты за время сбора одной фракции. Так, при скорости подачи элюента 30 мл / ч, скорости смещения ленты самописца 75 мм / ч и объеме фракций 1 мл расстояние между двумя вертикальными прямыми составляет 2 5 мм. Величину поглощения определяют в точке пересечения кривой элюирова-ния с вертикальной линией. Однако эти данные не пересчитывают на лейцин, поскольку в условиях анализа на аминокислотном анализаторе построение стандартной лейциновой линии является сложной задачей. Поэтому найденные величины поглощения суммируют, вычитают среднее значение фона, умноженное на число фракций, и в итоге получают число, соответствующее площади данного пика. [17]
Выбор подвижной фазы для таких сорбентов довольно сложен, поскольку полимер не должен набухать в этой среде, так как деформация пустот приводит к снижению селективности. Очень полезным элюентом оказалась смесь ацетонитрила с 4 - 6 % воды и 2 - 8 % концентрированного аммиака. Сильное влияние на результаты разделения оказывает скорость подачи элюента, и обычно скорости потока должны быть очень низки. [18]
Резиновую трубку пережимают ролики, смонтированные по периферии вращающегося диска. Продвигаясь вдоль трубки, каждый из роликов поочередно продавливает через нее жидкость в направлении своего движения. Степень сжатия трубки можно регулировать с помощью винта, прижимающего профилированную направляющую пластину, к которой прилегает трубка. Нередко конструкция насосов позволяет варьировать диаметр трубок, например в пределах от 1 до 3 мм, что дает возможность переходить от одного диапазона скоростей подачи элюента к другому. Внутри каждого диапазона плавная регулировка скорости подачи осуществляется изменением скорости вращения диска с роликом. Многие фирмы выпускают многоканальные насосы, где ролики пережимают одновременно несколько параллельно лежащих трубок одинакового диаметра, обеспечивая подачу жидкости с одинаковой скоростью по трем и более каналам. [19]
 |
Фракционирование семи пептидных гормонов ( / - 7 ион-парной хроматографией на колонке ц, Bondapak - C18 с добавлением разных гидрофобных контрионов ( текст [ Bennet et al., 1981 ]. [20] |
При разделении относительно крупных бромциановых пептидов а -, Р - и - цепей глобина человека 0 1 % - ный раствор ТФУ, помимо своей роли в осуществлении ион-парной хроматографии, оказался очень полезен как прекрасный растворитель для пептидов, в частности гидрофобных. Кроме того, раствор ТФУ прозрачен вплоть до А, 216 нм и легко удаляется лиофилизацией. Использование сорбента с меньшей, чем в рассмотренных выше примерах, гидрофобпостью обусловлено большими размерами пептидов. Колонку уравновешивали 0 1 % - ным водным раствором ТФУ, впрыскивали в нее 100 мкл смеси пептидов и вели элюцию линейным градиентом концентрации изопропанола ( от нуля со скоростью нарастания 1 6 % в минуту) в течение 1 ч при температуре 28 и скорости подачи элюента 0 7 мл / мин. [21]
В настоящее время сконструированы насосы объемом 0 5 - 50 мл, которые используются при относительно малых объемных скоростях. С помощью шприцевых насосов удается получить поток элюента, совершенно свободный от пульсации. Однако вследствие ограниченного объема эти насосы не обеспечивают подачу элюента во всем диапазоне объемных скоростей, неоходимом для обычных колонок. Как правило, скорость подачи элюента для таких насосов колеблется в интервале порядка 1 - 2 мл / мин. [22]
Новый метод анализа аминокислот быстро развивался. Вскоре стало очевидным, что анализ аминокислот в его первоначальном варианте слишком трудоемок и недостаточно эффективен. Ввиду этого был поставлен ряд исследований по механизации трудоемких операций и совершенствованию организации эксперимента. Благодаря проведению реакции аминокислот с нингидрином в проточном капиллярном реакторе и измерению интенсивности окраски на регистрирующем проточном фотометре трудоемкая обработка фракции была преобразована в непрерывный процесс. Таким образом, на основе аналитического метода был создан новый прибор - аминокислотный анализатор. Выпуск и дальнейшее усовершенствование этого прибора были предприняты промышленными фирмами. Последующие усилия были направлены на повышение эффективности и чувствительности анализа. Первое время причиной низкой эффективности прибора служила длительность элюирования. Основой для дальнейшей оптимизации процесса послужила теоретическая работа Гамильтона [5], в которой было показано, что повышения эффективности можно достигнуть путем увеличения скорости подачи элюента и уменьшения размеров зерен ионита. В результате многочисленных модификаций ионитов ( а эта работа все еще продолжается) удалось более чем в 10 раз сократить время элюирования без снижения разрешения. [23]
Страницы: 1 2