Сорбент - наносенок
Cтраница 2
 |
Прибор для получения нисходящей хроматограммы на незакрепленном слое. [16] |
Для получения хроматограмм в незакрепленном слое сорбент наносят на пластинку ( лучше матовое стекло) и разравнивают его валиком из нержавеющей стали или стеклянной трубкой. Процесс разделения проводят методом восходящей или нисходящей хроматографии. [17]
 |
Схема простейшего прибора для нисходящей хроматографии на пластинке с закрепленным слоем для одной пробы вещества [ 201. [18] |
Проточный метод можно проводить на пластинке, расположенной горизонтально. В этом случае рекомендуется прибор, схема которого изображена на рис. IV.8. Слой сорбента наносят на пластинку размером 20X20 см. Стартовую линию отмечают на расстоянии 1 5 см от края слоя. Боковые стороны очищают от слоя на ширину по 6 мм и на них наклеивают стеклянные пластинки толщиной 1 5 - 2 мм. Край пластинки со стороны стартовой линии укладывают на стенке резервуара с растворителем, в который опущена полоска фильтровальной бумаги для подачи растворителя на слой сорбента. Основную пластинку покрывают стеклянной пластинкой без сорбента и плотно прикрепляют к полозьям зажимами. На противоположном стартовой линии конце пластинки прикрепляют полоску фильтровальной бумаги, с которой растворитель стекает в пробирку. В камеру такой прибор не помещают. [19]
В ТСХ суспензией сорбента покрывают стеклянную или металлич. Размеры пластин варьируют от 2 X 2 до 10 X 20 см. На слой сорбента наносят капли анализируемого р-ра объемом 1 - 10 мкл. Край пластины погружают в р-ритель. Эксперимент проводят обычно в камере - стеклянном сосуде с притертой крышкой. [20]
Если в исходной смеси ганглиозидов содержатся большие количества Gnib и GTI ( мозг взрослых животных), для повышения выхода рекомендуется применять системы растворителей, в состав которых входит аммиак. В этом случае силикагель не должен содержать сульфата кальция. Сорбент наносят на колонку в виде суспензии в смеси хлороформ - метанол ( 9: 1 по объему), а ганглиозиды - в растворе в 50 мл смеси хлороформ - метанол - 3 М водный раствор аммиака. Моносиалоганглиозиды элюируются в указанном выше порядке. Дисиалоганглиозиды, в состав которых входит диси-алозильная группа, удерживаются сильнее, чем Gnia - Пик GDS перекрывается с начальным участком пика Gnia, a GD2 - с конечным участком того же пика. Ганглиозиды Ошь и GTI элюируются одним пиком, но хорошо отделяются от Gota - Выход GMI и Gma такой же, как в предыдущем случае, или немного выше, однако ганглиозиды бывают загрязнены сорбентом. [21]
Приготовление пластин для ТСХ имеет некоторые особенности. Так как порошки гидрофобны, их лучше суспендировать не в воде, а в метиловом или этиловом спирте или других органических растворителях. Жидкости обычно берут 3 - 4-кратное количество по отношению к массе сорбента. Сорбенты наносят на пластины обычным способом, пластины высушивают на воздухе, но активировать слой нагреванием не требуется. Данные о пластинах для ТСХ с готовыми полиамидными слоями приведены в разд. [22]
В колоночной хроматографии сорбент помешают в специальные трубки-колонки, в которых слой сорбента принимает форму цилиндра. В колоночной хроматографии используют набивные ( на-садочные) и капиллярные колонки. В набивных колонках весь объем трубок заполняется зернами сорбента. В капиллярных же колонках сорбент наносят только на внутреннюю поверхность в виде тонкого слоя ( а центральная часть остается пустой), поэтому их иногда называют незаполненными колонками. [23]
Стеклянные пластинки вставляют между планками. В другой работе [65] описано устройство, позволяющее за один прием приготовить 4 микропластинки размером 75X75 мм; слой сорбента наносят латунным аппликатором, размеры и конструкция которого приводятся в работе. [24]
Наполняют колонку следующим образом. Вначале в нижнюю часть колонки помещают тампон стекловаты, заливают элюент, насыпают слой кварцевого песка высотой 10 мм, затем постепенно, через ситечко насыпают сорбент. По мере заполнения колонки избыток элюента сливают через нижний кран. К концу заполнения колонки над поверхностью сорбента должен быть слой элюента около 2 - 3 мм. Затем на сорбент наносят концентрированный раствор исследуемой смеси ( объем раствора не должен быть больше Vi5 объема колонки) и открывают нижний кран. Как только испытуемый раствор впитается в слой сорбента, в колонку начинают подавать элюент. [25]
Страницы: 1 2