Cтраница 3
Высокой механической прочностью, достаточно однородным распределением пор, развитой и регулируемой поверхностью обладают пористые полимерные сорбенты на основе винильных производных пиридина, в частности макропористые сополимеры 2 5-метилвинилпиридина и ди-винилбензола. Благодаря наличию неподеленной пары электронов у атома азота пиридинового кольца сополимеры такого типа ( полисорбы N) следует отнести к специфическим сорбентам III типа. [31]
Использование декстрановых гелей частично ограничено из-за их относительно низкой пористости ( разд. Примеры их использования для аффинной хроматографии даны в табл. 11.1. Они широко применяются непосредственно ( без какой-либо модификации) в качестве специфических сорбентов для выделения ряда лектинов. [32]
В сборнике освещены материалы работ, выполненных институтом в последние годы в области исследования химического и элементного состава, молекулярной массы и других физико-химических свойств нефтей и тяжелых нефтепродуктов. Приведены результаты разработки и применения к исследованию нефтепродуктов таких современных методов, как жидкостная хроматография на силикателе, полнстиролышх гелях и специфических сорбентах, масс-спектрометрия, радиоспектроскопия, атомно-абсорбционная и эмиссионная спектроскопия; молекулярная спектроскопия успешно использована для исследования остаточных нефтепродуктов как сырья коксования, рентгеноструктурный анализ, в том числе и малоугловое рассеяние рентгеновских лучей, - для исследования структуры ас-фальтенов и нефтяных коксов. Приведены также результаты изучения влияния ряда параметров на качество продуктов, получаемых при переработке нефтяного сырья, и разработки лабораторных установок для воспроизведения качества продуктов, получаемых на промышленных установках. [33]
Фотоионизационный детектор позволяет прямым методом ( без получения производных, см. гл. С помощью ФИД можно селективно детектировать 0 5 - 1 0 ppm NO и 20 - 30 ррт чрезвычайно агрессивного NO2 после разделения этих газов на короткой насадоч-ной колонке с купрумсорбом ( специфический сорбент на основе макропористого сульфокатионита в Си2 - форме) при температуре 80 - 90 С. Оснащенный ФИД переносный газовый хромаограф дает возможность прямо на фабрике определять кофеин в напитках типа колы после предварительной экстракции. [34]
Когда образовавшиеся соединения РРНК с аминокислотами перемешиваются затем с частичками сорбента при рН 7, 8 ( боратный буфер с высокой ионной силой 1 5М по NaCl, чтобы полностью экранировать заряды полинуклеотидной цепи), заметная часть РРНК связывается со специфическим сорбентом. [35]
Изучение оптимальных условий сорбции предполагает, что аффинный лиганд присоединен к нерастворимому носителю с достаточно высокой пористостью и на достаточном расстоянии от его поверхности ( разд. Свойства пространственной группы, вводимой между аффинным лигандом и поверхностью нерастворимой матрицы [6], могут оказывать влияние на свойства сорбента, как и концентрация аффинного лиганда. Специфический сорбент должен быть приготовлен таким способом, чтобы все группы, способные к присоединению, были блокированы ( разд. Однако особенно важно, чтобы все молекулы аффинного лиганда, которые не присоединились к носителю ковалентной связью, были тщательно отмыты ( разд. [36]
О Карра [43] рекомендует различать аффинные системы с небольшими лигандами и с макролигандами. Специфические сорбенты, приготовленные из них, обычно лучше охарактеризованы, потому что эти лиганды присоединяются к носителю определенными функциональными группами. [37]
Все эти методы имеют много общих черт; это касается также и типичной биоспецифической аффинной хроматографии. Как правило, они основаны на образовании специфических комплексов биологически активных веществ, причем один из компонентов в комплексе иммобилизован на нерастворимой матрице. Методы приготовления специфических сорбентов практически идентичны; общими являются такие проблемы, как влияние нерастворимого носителя и пространственная доступность иммобилизованного лиганда. Часто трудно определить, имеет ли место типичное биоспецифическое связывание или все же преобладают неспецифические гидрофобные взаимодействия, например если сорбция происходит на носителе, модифицированном гидрофобной пространственной группой. Тем не менее можно ожидать, что по крайней мере некоторые из перечисленных разовьются в самостоятельные методы, особенно гидрофобная хроматография, которая использует нековалентные взаимодействия гидрофобных участков на поверхности белковых молекул с гидрофобными литандами, связанными с нерастворимыми носителями. [38]
Порат и Кристиансен [32] рекомендуют специфические сорбенты в виде геля помещать в контейнеры с полупроницаемыми стенками, через которые могут свободно проходить растворенные вещества, но задерживаются крупные частицы. При погружении в среду нескольких мешочков, содержащих различные специфические сорбенты, можно одновременно выделить несколько веществ или же удалить из раствора нежелательные вещества, такие, как протеолитические ферменты, которые могут понижать выходы выделяемых веществ. [39]
Выделение агглютинина из зародышей пшеницы [34] на сефарозе с ковалентно связанным 2-ацетамидо - М - ( е-аминокапро-нил - 2-дезокси - 3-о-глюкопиранозиламином является примером использования специфического сорбента, приготовленного ковалент-ным присоединением моносахарида к нерастворимому носителю. Хорейши и Коцоурек [27] приготовили ряд специфических сорбентов для выделения фитогемагглютининов из различных источников путем сополимеризации алкенил - О-гликозидов с акриламидом и К М - метиленбисакриламидом. Таким способом полученные гидрофильные гели содержат сахара, связанные О-гликозидными связями с алкильными боковыми цепями матрицы. [40]
Для исследования влияния гидрофобных цепей на взаимодействие лактатдегидрогеназы с 8 - ( со-аминоалкил) - производными аде-нозин-5 - фосфата Лоу [1] синтезировал производные, содержащие полиметиленовые пространственные группы разной длины. Как видно из рис. 2, определенные в растворе значения констант инги-бирования ( Ki) лежат в интервале 1 - 6 ммоль / л, достигая максимальной величины для 8 - ( 4-аминобутил) аденозин-5 - фосфата. Для иммобилизованных производных на сефарозе сила взаимодействия между лактатдегидрогеназой и соответствующими иммобилизованными аффинными лигандами, определенная по концентрации NADH, необходимой для вытеснения фермента со специфического сорбента, при увеличении числа метиленовых групп возрастает, что можно объяснить повышающейся доступностью иммобилизованного аффинного лиганда. [41]
Выделение агглютинина из зародышей пшеницы [34] на сефарозе с ковалентно связанным 2-ацетамидо - М - ( е-аминокапро-нил - 2-дезокси - 3-о-глюкопиранозиламином является примером использования специфического сорбента, приготовленного ковалент-ным присоединением моносахарида к нерастворимому носителю. Хорейши и Коцоурек [27] приготовили ряд специфических сорбентов для выделения фитогемагглютининов из различных источников путем сополимеризации алкенил - О-гликозидов с акриламидом и К М - метиленбисакриламидом. Таким способом полученные гидрофильные гели содержат сахара, связанные О-гликозидными связями с алкильными боковыми цепями матрицы. [42]
Алюмогель ( активный оксид алюминия) - частично гидратиро-ванный оксид алюминия. Воды в нем 1 - 3 %, Sya - 170 - 300 м2 / г. Получают его из чистого гидроксида алюминия, который активируют азотной кислотой, а затем нагревают при 450 С. При 500 С активный у-оксид превращается в неактивную а-модификацию. Промышленность выпускает активный оксид алюминия двух сортов: А-1 и А-2. Это полярный специфический сорбент, но менее пористый, чем силикагель. Кроме того, он обладает меньшим поляризующим действием, чем силикагель. С повышением температуры колонки его каталитические свойства возрастают, что невыгодно в хроматографии. Применяя оксид алюминия, дезактивированный 2 % воды, можно значительно уменьшить удерживаемый объем высококипящих веществ и осуществить десорбцию легкокипящих компонентов без нагрева колонки. Перед заполнением колонки оксид алюминия прокаливают до постоянной массы при 200 - 300 С. [43]
Из вышеизложенного следует, что кроме природы нерастворимого носителя существенную роль играет также метод связывания. В табл. 8.12 дан обзор методов связывания, рассмотренных в разд. При выборе методов связывания главное внимание уделяется тому, какие группы аффинного лиганда можно использовать для присоединения к нерастворимой матрице без затрагивания связывающих участков аффинных лигандов. Если доступно несколько групп, рекомендуется выбрать наиболее избирательный метод, потому что желательна специфическая связь через одну определенную функциональную группу. Присоединение не должно приводить к появлению в специфическом сорбенте неспецифически сорбирующих групп. [44]
Развитие аффинной хроматографии сопровождается увеличением количества продажных иммобилизованных аффинных лигандов. Можно полагать, что то же ожидает и другие хроматографические материалы. Точно так же как сегодня в очень редких лабораториях готовят ДЭАЭ - и КМ-целлюлозу, совершенно закономерно, что будет постепенно увеличиваться использование продажных биоспецифических сорбентов. Это справедливо прежде всего для сорбентов с групповой специфичностью или сорбентов специфических к веществам, постоянно получаемым в лабораториях, и обусловлено специфической природой аффинной хроматографии. Из разнообразия биологически активных веществ следует, что необходим очень широкий ассортимент специфических сорбентов; поэтому много научных работников, по-видимому, будут вынуждены сами готовить специальные высокоэффективные сорбенты. [45]