Сорбция - фермент
Cтраница 1
Сорбция ферментов может осуществляться различными путями, которые нередко проходят взаимозависимо, или одновременно несколькими путями, являющимися стадиями одного общего процесса сорбции определенных ферментов. [1]
Сорбция ферментов ионитами протекает значительно сложнее, чем сорбция аминокислот, белков и антибиотиков, так как ионообменный процесс может привести к частичной или полной инактивации ферментов вследствие главным образом значительного изменения рН раствора. Содержание в растворе ( вытяжке, культуральной жидкости) электролитов препятствует сорбции ферментов ионообменными смолами. Для сорбции ферментов могут быть использованы только слабоосновные аниониты или слабокислотные катиониты. Амилолитические ферменты сорбируются некоторыми ионитами ( СГ, КМЦ, ЭДЭ-10П, амберлай-тами) только после предварительного диализа раствора. [2]
Сорбция ферментов ионообменными смолами довольно затруднительна и протекает сложнее, чем сорбция аминокислот, белков и антибиотиков. [3]
Под обратимостью сорбции фермента принимается его полная десорбция со смолы при сохранении ферментативной активности. [4]
Первой стадией механизма сорбции ферментов, а часто и единственной его стадией, является молекулярная сорбция, протекающая без химического взаимодействия с поверхностью сорбента. [5]
Иная картина наблюдается при очистке эндоглюканаз в режиме сорбции фермента с последующей его элюцией путем увеличения ионной силы. Как уже отмечалось, для этого требуется нанесение фермента при рН 7 - 8 5, что наряду с длительностью процесса ( особенно при использовании мягких носителей типа сефадекс) приводит к значительным, до 90 %, потерям активности фермента. Выходом из этого положения является применение более жестких носителей на основе сферона, трисак-рила, методов ВЭЖХ. Как будет показано ниже, это позволяет значительно увеличить разрешающую способность методов при практически полном сохранении активности фермента за счет быстрого проведения процесса. [6]
 |
Сорбция силикагелем амилазы. [7] |
Установлено, что с увеличением концентрации амилазы в ферментном растворе сорбция фермента повышается. [8]
Присутствие этих хелатирующих агентов в концентрации - 5 мМ предотвращает сорбцию фермента на упомянутых специфических сорбентах. Влияние рН на аффинную хроматографию обсуждалось в разд. [10]
Необходимо отметить, что непременным условием действия эластазы на эластин является сорбция фермента на субстрате. [11]
Нами установлено, что сильные катиониты или аниониты не могут быть использованы для сорбции ферментов, и поэтому все дальнейшие исследования были проведены с слабокислотными катионитами и слабоосновными анионитами. [12]
Будем считать, что на первом этапе происходит сближение частиц, которое включает остановку лиганда L против центра сорбции фермента - Е с одновременным замораживанием вращения и некоторых колебательных степеней свободы. При этом система Е - f - L принимает состояние, близкое к переходному состоянию образования связи E-L. [13]
В качестве сорбентов - носителей ферментов часто используют гель гидроокиси алюминия или фосфата кальция, диатомит, модифицированный крахмал, бентониты, кизельгуры и др. Сорбцию ферментов осуществляют либо в колонках путем пропускания раствора фермента с определенной скоростью через слой ионитов, либо в реакторах, в которых сорбент определенное время перемешивают с раствором фермента. Полученный продукт затем используют как иммобилизованный ферментный препарат. Адсорбция фермента к носителю не обеспечивает их длительную стабилизацию. Более длительную стабилизацию обеспечивает ионообменное связывание фермента, например на модифицированных ионообменных целлюлозах. [14]
Кроме того, в ферментном растворе ( в вытяжке или куль-туральной жидкости) всегда содержится определенное количество электролитов, белковых веществ и продуктов их распада, которые препятствуют сорбции ферментов ионообменными смолами. [15]
Страницы: 1 2